1、问答题  YAC载体具有什么样的功能性DNA序列？为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性？

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本题答案：YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一
本题解析：试题答案YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

2、多项选择题  下列因素中影响限制酶切割的有（）

A.EDTA浓度
B.甘油浓度
C.DNA纯度
D.酶的自身活性
E.盐浓度

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

3、问答题  什么是基因？根据基因的产物，基因可分为哪三类？

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本题答案：基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核
本题解析：试题答案基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核苷酸序列，是分子遗传的功能单位。
根据基因的产物，基因可分为三类：
转录并翻译编码蛋白质的基因：
包括结构蛋白基因、编码酶的基因、调节基因
转录但不翻译产物的基因：
包括tRNA、rRNA
不转录但有功能的DNA区段：
如启动子、操纵基因

4、问答题  如何有效地提高外源基因的表达效率？

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本题答案：⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距
本题解析：试题答案⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距离
⑶高效的翻译起始序列
⑷高效的转录终止区
⑸提高质粒拷贝数及稳定性
⑹用以下方法提高翻译水平：
①调整SD序列与AUG间的距离
②用点突变的方法改变某些碱基
③增加mRNA的稳定性的
⑺减轻细胞的代谢负荷：
①诱导表达
②表达载体的诱导复制
⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：
①克隆一段原核序列，表达融合蛋白
②采用某种突变菌株
③表达分泌蛋白质

5、问答题  引起核酸变性的因素主要有哪些？核酸变性后性质有何变化？

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本题答案：引起核酸变性的因素：--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。<
本题解析：试题答案引起核酸变性的因素：--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。
DNA变性后，它的一系列性质发生变化，如紫外吸收（260nm）值升高（增色效应），粘度降低等，如DNA增加25－40%.RNA约增加1.1%。

6、问答题  什么是质粒的相容性？什么是不相容群？机制是什么？

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本题答案：质粒的相容性：是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如
本题解析：试题答案质粒的相容性：是指两种质粒是否可以共存于同一个细胞，如果能够共存则叫相容（又叫亲和），不能共存则称为不相容。从本质上说，能够共存于同一个细胞中的质粒具有不同的复制机制，因而复制时互不干涉，并保持稳定。根据质粒的这一特性将质粒分为若干个不相容群。同一个不相容群中的质粒不能共存于同一个细胞，因为他们的复制机制相同，因而饭能共存于同一个细胞中的质粒属于不同的不相容群，因为他们的复制机制不同。

7、问答题  分析影响酶切的因素。

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本题答案：1）DNA的纯度：DNA等都会影响酶的活性。
本题解析：试题答案1）DNA的纯度：DNA等都会影响酶的活性。
2）DNA的甲基化程度：dam甲基化酶（修饰GATC中的A.；dcm甲基化酶（修饰CCA/TGG的C.。
3）温度：不同的限制性内切酶的最适反应温度不同。大多数是37oC，少数要求40-65oC。
4）缓冲液（Buffer）：是影响限制酶活性的重要因素。

8、单项选择题  质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（）①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”

A.①③⑤⑦
B.②④⑥
C.①③⑥⑦
D.②③⑥⑦

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

9、名词解释  目的基因（objective gene）

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本题答案：又叫靶基因（target gene），是指根据基因工程
本题解析：试题答案又叫靶基因（target gene），是指根据基因工程的目的，设计的所需要的某些DNA分子片段，它含有一种或几种遗传信息的全套密码（code）

10、问答题  常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？

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本题答案：限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；DNA
本题解析：试题答案限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；DNApol1：催化缺口平移，制备高比度DNA探针；Klenow片段：合成cDNA第二条链，补齐或标记DNA3’端；逆转录酶：催化合成cDNA；DNA连接酶：催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键；末端脱氧核苷酸转移酶：给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物；碱性磷酸酶：防止载体自身连接、32p标记5’端.

11、问答题  DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。

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本题答案：在碱性环境下，核酸分子带负电荷，在外加电场的作用下，分
本题解析：试题答案在碱性环境下，核酸分子带负电荷，在外加电场的作用下，分子在凝胶多孔性刚性滤孔中从负极向正极泳动，其中主要由于分子筛效应和电荷效应达到分离不同大小核酸分子的目的。

12、问答题  基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些？

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本题答案：切、接、转、增、筛（检）
本题解析：试题答案切、接、转、增、筛（检）

（1）切——获得DNA片段，取得目的基因；载体的选择与制备。
方法：从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物
从总RNA中分离得到mRNA，再逆转录得到cDNA
人工合成——化学合成；PCR（聚合酶链式反应）
（2）接——DNA片段和载体DNA在体外连接，形成重组子。
（3）转——将重组的DNA引入宿主细胞
方式：转化——某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的现象；转染——除去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程；转导——用噬菌体做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。
（4）增——培养已转化细胞，使目的基因在其中进行复制、扩增，并将其整合到受体细胞的基因组中。
（5）筛、检——重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效表达的基因工程菌或细胞。

13、单项选择题  变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是（）

A.氧化物可使DNA的磷酸二酯键断裂
B.氧化物同DNA形成复合物
C.氧化物会改变pH值
D.氧化物在DNA分离后不易除去

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

14、名词解释  cDNA library:cDNA文库

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本题答案：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载
本题解析：试题答案是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。

15、多项选择题  限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（）

A.限制酶失活
B.有抑制剂如SDS，EDTA等存在
C.反应条件不合适
D.DNA不纯
E.DNA结构（线形或超螺旋）的影响

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

16、填空题  当目的片段无限长时，使用识别碱基数为4和6的限制性内切酶进行切割时，理论上产生的片段数之比是（）。

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本题答案：16：1
本题解析：试题答案16：1

17、问答题  试述载体构建一般方法

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本题答案：A目的基因分析
（1）ORF分析

本题解析：试题答案A目的基因分析
（1）ORF分析
（2）酶切位点分析
B载体选择与分析
（1）多克隆位点分析
（2）抗性标记分析
（3）启动子与其他筛选标记分析
C连接体系与连接时间确定

18、问答题  合成cDNA第二链的主要策略有哪些？

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本题答案：①自身引导合成法
②置换合成法
③
本题解析：试题答案①自身引导合成法
②置换合成法
③PCR合成法
④快速扩增cDNA末端法
⑤双链cDNA末端的处理
⑥cDNA与载体的连接

19、问答题  作为基因工程载体，其应具备哪些条件？

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本题答案：具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
本题解析：试题答案具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
具有合适的筛选标记；
具有较高的外源DNA的载装能力；
具有多克隆位点（MCS）；
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。

20、问答题  酚与氯仿联合使用的好处？

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本题答案：原因是酚和水有一定程度的互溶，所以单独使用酚抽提DNA
本题解析：试题答案原因是酚和水有一定程度的互溶，所以单独使用酚抽提DNA，最终不能除去酚，残留的酚会使起切割和连接作用的限制性内切核酸酶和连接酶变性。氯仿也是蛋白质变性剂，它不与水互溶，但是能够同苯酚互溶。这样，酚和氯仿联合使用，就可以带走残留的酚

21、单项选择题  DNA回收时，如要除去EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（）

A.正丁醇
B.苯酚
C.氯仿
D.异戊醇
E.乙醇

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

22、单项选择题  考斯质粒（cosmid）是一种（）

A.天然质粒载体
B.由λ-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体
C.具有溶原性质的载体
D.能在受体细胞内复制并包装的载体

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

23、单项选择题  需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（）

A.反应时间
B.反应体积
C.PH
D.限制酶量
E.反应温度

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

24、问答题  什么是同聚物加尾连接法？用何种方法加尾？具有哪些优缺点？

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本题答案：所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DN
本题解析：试题答案所谓同聚物加尾法就是利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA（dG）和dT（dC.，然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。
同聚物加尾法实际上是一种人工黏性末端连接法，具有很多优点：
（1）首先不易自身环化，这是因为同一种DNA的两端的尾巴是相同的，所以不存在自身环化。
（2）因为载体和外源片段的末端是互补的黏性末端，所以连接效率较高。
（3）用任何一种方法制备的DNA都可以用这种方法进行连接。
同聚物加尾法也有一些不便之处：
（1）方法繁琐；
（2）外源片段难以回收。由于添加了许多同聚物的尾巴，可能会影响外源基因的表达。另外要注意的是，同聚物加尾法同平末端连接法一样，重组连接后往往会产生某种限制性内切核酸酶的切点。

25、单项选择题  cDNA第一链合成所需的引物是（）

A、PolyA
B、PolyC
C、PolyG
D、PolyT
E、发夹结构

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本题答案：D
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26、问答题  质粒的不相容性及其分子机理。

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本题答案：定义：任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存
本题解析：试题答案定义：任何两种含有相似复制子结构的不同质粒，不能同时存在于一个细胞中，这种现象称为质粒的不相容性。
分子机理：两种含有相似复制子结构的不同质粒，在复制同时受到同一种拷贝数控制系统的干扰，致使两种质粒的最终拷贝数不同，其中拷贝数多的质粒在以后的细胞分裂周期中更具优势。

27、单项选择题  识别10碱基序列的限制酶，大约每隔（）进行一次切割。

A.4l0
B.104
C.2l0
D.102
E.24

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

28、单项选择题  载体的功能是（I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力）（）

A.I
B.I+III
C.II+III
D.I+II+III

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

29、单项选择题  关于感受态细胞的下列说法不正确的是（）

A.有人工感受态细胞和自然感受态细胞。
B.具有可诱导性。
C.有可转移性。
D.不同种细菌出现感受态的生理时期不同。
E.不同种细菌出现感受态的比例不同。

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

30、单项选择题  TaqDNA聚合酶的发现使得PCR技术的广泛运用成为可能，这是因为（）

A、TaqDNA聚合酶能有效地变性基因扩增产物
B、TaqDNA聚合酶催化的聚和反应不需要引物
C、TaqDNA聚合酶具有极强的聚和活性
D、TaqDNA聚合酶能使多轮扩增反应连续化
E、TaqDNA聚合酶能使扩增反应在DNA变性条件下进行

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

31、名词解释  基因芯片（gene chip）

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本题答案：又称DNA芯片，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段
本题解析：试题答案又称DNA芯片，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段有规律地排列固定于支持物上，样品DNA/RNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子，然后按碱基配对原理进行杂交，再通过荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号作出比较和检测，从而迅速得出所要的信息。

32、单项选择题  外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是（I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III表达产物易于亲和层析分离）（）

A.III
B.I+II
C.I+III
D.II+III

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

33、单项选择题  鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（）

A、原核细菌
B、酵母菌
C、丝状真菌
D、植物
E、人类

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

34、单项选择题  强化基因转录的元件是（）

A、密码子
B、复制子
C、启动子
D、内含子
E、外显子

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

35、单项选择题  基因工程操作常用的酶是：（I内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶）（）

A.I+II
B.I+III+IV
C.II+III+IV
D.I+II+IV+III

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

36、问答题  Southern杂交一般过程及影响杂交因素。

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本题答案：Southern杂交操作步骤：
（1）用限制
本题解析：试题答案Southern杂交操作步骤：
（1）用限制性内切酶酶切DNA，经凝胶电泳分离各酶切片段；
（2）转膜：将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上；
（3）预杂交：封阻滤膜上非特异性位点；
（4）杂交：让探针与同源DNA片段特异性结合；
（5）洗脱：去除非特异性结合的探针；
（6）自显影检查目的DNA所在的位置。
Southern杂交影响因子
1）、目的DNA在总DNA中所占的比例
2）、探针的大小和标记效率
3）、转移到滤膜上的DNA量
4）、探针与靶DNA的同源性

37、问答题  为什么反转录酶在聚合反应中会出错？

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本题答案：因为反转录酶无3′→5&prim
本题解析：试题答案因为反转录酶无3′→5′外切酶校正作用，聚合反应往往出错。在高浓度的dNTP和Mn2+存在时错误率为1/500b。

38、单项选择题  下列属于获取目的基因的方法的是（） ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录⑥人工合成

A.①②③⑤
B.①②⑤⑥
C.①②③④
D.①②④⑥

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

39、问答题  小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

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本题答案：最可能的原因：从细菌沉淀或从核酸沉淀中吸上清时注意不够
本题解析：试题答案最可能的原因：从细菌沉淀或从核酸沉淀中吸上清时注意不够，带了杂蛋白。其最根本的原因是因为细菌的细胞壁成分或核内某些蛋白质可能抑制限制酶活性。克服方法：用酚氯仿对溶液抽提；用离心柱层析法纯化DNA。

40、问答题  什么叫染色体步查？其用途如何？

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本题答案：染色体步查：采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA
本题解析：试题答案染色体步查：采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。重复这一过程，直到得到整个目的基因区。用途：主要用于基因定位克隆，尤其是克隆与分析组成某一基因家族的真核DNA区段。

41、问答题  大肠杆菌作为外源基因表达系统有哪些优缺点？

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本题答案：优势：
①遗传背景清楚：全基因组测序，共有4
本题解析：试题答案优势：
①遗传背景清楚：全基因组测序，共有4405个开放型阅读框架；
②繁殖迅速、培养简单、操作方便、遗传稳定；
③基因克隆表达系统成熟完善；
④目标基因表达水平高；
⑤代谢途径和基因表达调控机制比较清楚
缺点：
①缺乏对真核生物蛋白质的复性功能；
②缺乏对真核生物蛋白质的修饰加工系统；
③内源性蛋白酶降解空间构象不正确的异源蛋白；
④细胞周质内含有种类繁多的内毒素。

42、问答题  在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变为平端的方法有哪些？

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本题答案：（1）5’—突出黏性末端的补平
本题解析：试题答案（1）5’—突出黏性末端的补平，一般选用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow大片段聚合酶进行填补；
（2）3’—突出黏性末端的切平，一般选用T4噬菌体DNA聚合酶或单链DNA的SI核酸切平。

43、填空题  受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许有外源DNA的载体分子通过，这种细胞称为（）。

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本题答案：感受态细胞
本题解析：试题答案感受态细胞

44、问答题  黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。

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本题答案：黏性末端连接法不足之处有：
（1）载体易自身
本题解析：试题答案黏性末端连接法不足之处有：
（1）载体易自身环化；
（2）若是用同一种限制性内切核酸酶产生的黏性末端连接又不易定向克隆；
（3）难插入特定的基因；
（4）再者就是大片段DNA的重组率较低，即使用碱性磷酸酶处理了载体，防止了载体的自身环化，载体也有成环的倾向；
（5）用这种方法产生的重组体往往含有不止一个外源片段或不止一个载体连接起来的串联重组体，增加筛选工作的困难。

45、单项选择题  第一个作为重组DNA载体的质粒是（）

A.pBR322
B.ColEl
C.pSCl01
D.pUCl8

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

46、单项选择题  用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（）

A.略短
B.等长
C.略长
D.A或B都可
E.A、B、C都可

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

47、单项选择题  某一重组DNA的载体部分有两个BamHI酶切位点。用BamHI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的BamHI酶切位点共有（）

A.4个
B.3个
C.1个
D.2个

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

48、问答题  重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。

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本题答案：从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如
本题解析：试题答案从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如下几个类型：
（1）基于载体遗传标记检测法
在构建基因工程载体系统时，载体DNA分子上通常携带了一定的选择性遗传标记基因，转化或转染宿主细胞后可以使后者呈现出特殊的表型或遗传学特性，据此可进行转化子或重组子的初步筛选。
（2）基于克隆DNA序列检测法
Southern印迹杂交：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与已标记的单链DNA探针的杂交作用以检测这些被转移的DNA片段。
（3）基于外源基因产物检测法
如果目的基因产物能降解某些药物使菌株呈现出抗性标记，或者基因产物与某些药物作用是显颜色反应，则可根据抗性或颜色直接筛选含目的基因的克隆子。

49、填空题  在抽提DNA中，酚的作用是（），氯仿的作用是增加比重，有助于分相。

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本题答案：去除蛋白
本题解析：试题答案去除蛋白

50、问答题  如何将一平末端的DNA片段与BamHI形成的粘末端连接？

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本题答案：使用加接头连接法。人工合成一段含BamHI酶切位点的D
本题解析：试题答案使用加接头连接法。人工合成一段含BamHI酶切位点的DNA短片段，然后与该平末端片段两端连起来，用BamHI切割连接片段，即可形成BamHI的粘末端。

51、单项选择题  线性质粒复制的引物来自于（）

A.细胞中合成的小分子RNA
B.自身末端的端粒序列
C.外加的寡聚DNA
D.自身断裂的小分子DNA

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

52、单项选择题  下列哪一种酶作用时需要引物？（）

A.限制酶
B.末端转移酶
C.反转录酶
D.DNA连接酶

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

53、单项选择题  提高重组率的方法包括（I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间）（）

A.I+II
B.I+II+III
C.I+III+IV
D.II+III+IV

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

54、问答题  小批量碱变性提取质粒DNA的原理与基本过程如何？

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本题答案：碱变性法是常用的质粒抽提方法，其原理是基于染色体DNA
本题解析：试题答案碱变性法是常用的质粒抽提方法，其原理是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性的差异而达到分离目的。在pH值高达12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，双螺旋结构解开而变性。质粒DNA的大部分氢键也断裂，但超螺旋共价闭合环状的两条互补链不会完全分离，当以pH4.8的NaAc高盐缓冲液去调节其pH值至中性时，变性的质粒DNA又恢复原来的构型，保存在溶液中，而染色体DNA不能复性而形成缠连的网状结构，通过离心，染色体DNA与不稳定的大分子RNA、蛋白质－SDS复合物等一起沉淀下来而被除去。
小批量碱变性提取质粒DNA的基本过程为——
（1）酶或机械法等方法破坏细胞，释放出胞内物质；
（2）加碱使DNA与蛋白质变性，加中和液复性。因为质粒DNA分子量小易复性，从而使得其与基因组DNA分离；
（3）在上清液中通过酚－氯仿抽提、去垢剂或酶使剩余蛋白质变性或水解，除去蛋白质；
（4）再加入醇溶液使质粒DNA变性沉淀而与其他水溶性物质分离；
（5）将沉淀溶解于有RNase的TE溶液中，温育降解RNA后电泳检测、-20℃保存。

55、填空题  DNA分子标记的方法有（）；（）、末端标记法、交换反应标记法四种。

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本题答案：缺口平移法、随机引物法
本题解析：试题答案缺口平移法、随机引物法

56、问答题  核酸操作的基本技术有哪些？

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本题答案：①核酸提取与纯化
②核酸的检测与保存
本题解析：试题答案①核酸提取与纯化
②核酸的检测与保存
③核酸的凝胶电泳
④核酸分子杂交

57、名词解释  Southern blotting:Southern印迹

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本题答案：Southern发明的一种影印转移物质的方法。
本题解析：试题答案Southern发明的一种影印转移物质的方法。

58、问答题  PCR技术主要应用在哪些领域？

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本题答案：①核酸基础研究
②序列分析
③检测基
本题解析：试题答案①核酸基础研究
②序列分析
③检测基因表达
④从cDNA文库中放大特定序列
⑤研究已知片段邻近基因或未知DNA片段
⑥进化分析
⑦医学应用
⑧分析生物学证据
⑨性别控制
⑩转基因检测。

59、问答题  转基因是一把双刃剑，请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。

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本题答案：转基因技术所带来的好处是显而易见的，在人类历史进步和发
本题解析：试题答案转基因技术所带来的好处是显而易见的，在人类历史进步和发展中起到了积极作用。
首先，通过该项技术可以提供人们所需要的特性，改良培育新品种；
第二，延长食品保存时间或增加营养成分；
第三，将抗虫防菌基因转入到作物中，使作物本身产生抵抗病虫害侵袭的能力，减少了农药的使用量，有利于环境保护；
第四，转基因技术及基因食物在医学方面得到广泛研究和应用。
人们对转基因技术的主要担忧在于环境方面。外源基因的导入可能会造就某种强势生物，产生新物种或超级杂草、损害非目标生物、破坏原有生物种群的动态平衡和生物多样性，也即转基因生物存在潜在的环境安全问题。
转基因作物的大面积种植已有数年，食用转基因食品的人群至少有10亿之多，但至今仍未有转基因食品对生命造成危害的实例；更何况目前每一种基因工程食品在上市前，都要经过国家法律认可，食品卫生部门和环境部门的严格检测。只有测试合格了，才能投放市场。因此公众完全可以安全地消费、大胆地食用转基因食品。

60、填空题  基因工程所用的工具酶有（）；（）、连接酶、修饰酶四大酶类。

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本题答案：核酸酶、聚合酶
本题解析：试题答案核酸酶、聚合酶

61、名词解释  柯斯（C0S）质粒

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本题答案：带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA顺序的大肠
本题解析：试题答案带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA顺序的大肠杆菌质粒。

62、填空题  限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（）DNA。

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本题答案：单、双
本题解析：试题答案单、双

63、问答题  如何提高克隆基因的表达水平？

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本题答案：1）、表达载体的优化设计；
2）、提高目标基
本题解析：试题答案1）、表达载体的优化设计；
2）、提高目标基因mRNA和目标基因产物的稳定性；
3）、密码子偏爱性；
4）、表达环境条件的优化。

64、多项选择题  构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（）

A.避免载体自身环化
B.提高连接效率
C.控制外源基因的插入方向
D.便于转化后的筛选
E.便于修改阅读框

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本题答案：A, B, C, D
本题解析：暂无解析

65、问答题  在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

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本题答案：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓
本题解析：试题答案目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。

66、单项选择题  带有多个不同种复制起始区的质粒是（）

A、穿梭质粒
B、表达质粒
C、探针质粒
D、整合质粒
E、多拷贝质粒

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

67、问答题  基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？

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本题答案：1）大肠杆菌DNA聚合酶
2）Klenowf
本题解析：试题答案1）大肠杆菌DNA聚合酶
2）Klenowfragment
3）T7DNA聚合酶
4）T4DNA聚合酶
5）修饰过的T7DNA聚合酶
6）逆转录酶
7）TaqDNA聚合酶

68、问答题  当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？

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本题答案：要避免星活性及部分酶切。
（1）先用低盐缓冲
本题解析：试题答案要避免星活性及部分酶切。
（1）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；
（2）用一种酶消化后，以酚：氯仿：异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将DNA重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；
（3）先低温酶，后高温酶；
（4）使用通用缓冲液。

69、问答题  为什么用同裂酶进行体外重组效率最高？

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本题答案：同裂酶是指来源不同的限制酶切割DNA后，产生相同的末端
本题解析：试题答案同裂酶是指来源不同的限制酶切割DNA后，产生相同的末端。多数同裂酶产生的粘性末端并非完全一致而是有四个碱基相同，这样用同裂酶切割载体和目的基因后的连接产物常会失去原有的限制酶位点，这样用同裂酶进行重组时，限制酶切割反应后不用将该酶失活，即可直接进行重组连接，由于连接体系中原有限制酶存在，载体自连不会发生，从而保证了载体只同外源DNA的连接。

70、单项选择题  下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大？（）

A.质粒
B.黏粒
C.酵母人工染色体（YAC）
D.λ噬菌体

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

71、问答题  理想质粒载体的必备条件？

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本题答案：⑴具有较小的分子质量和较高的拷贝数。
⑵具有
本题解析：试题答案⑴具有较小的分子质量和较高的拷贝数。
⑵具有若干限制性核酸内切酶的单一酶切位点。
⑶具有两种以上的选择标记基因。
⑷缺失mob基因。
⑸插入外源基因的重组质粒较易导入宿主细胞并自制和表达。

72、名词解释  质粒不亲和性

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本题答案：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中
本题解析：试题答案在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。

73、问答题  可采用哪些方法进行目的片段与载体的连接？

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本题答案：（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，
本题解析：试题答案（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，产生匹配的粘性末端，可直接进行连接。
（2）目的片段与载体经限制性内切酶切割后，产生平末端，也可直接进行连接。但是由于平末端连接效率较低，可采用下面的方法进行连接。
（3）同聚物加尾法：利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA（dG）和dT（dC.，然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。
（4）接头连接法：将人工合成的或来源于现有质粒来源:91考试网 www.91exAm.org的一小段DNA分子加到载体或外源DNA的分子上，在这一小段DNA分子上有某种限制性内切核酸酶的识别序列，这样便在载体DNA和外源DNA上制造出新的酶切点，产生匹配的黏末端以便于连接。这一小段含有酶切点的DNA分子称为连接器分子。
（5）PCR接头法：设计含有限制酶切位点的引物，在PCR过程中在目的片段直接加上接头

74、问答题  出现转基因沉默现象的可能原因分析。

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本题答案：（1）位置效应：指插入部位及其周围序列对外源基因的影响
本题解析：试题答案（1）位置效应：指插入部位及其周围序列对外源基因的影响
（2）DNA甲基化：包括编码序列和启动子的甲基化
（3）重复序列诱发基因沉默：多拷贝串联重复序列易引起外源基因的失活；
（4）共抑制（co-suppression）：具有部分同源性的外源基因和植物内源基因相互作用引起的沉默现象。

75、问答题  基因工程在食品工业上有何应用发展？

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本题答案：主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调
本题解析：试题答案主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率；或者改良这些有机物组成成分，提高利用价值。

76、问答题  克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？

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本题答案：表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类
本题解析：试题答案表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类，具体包括如下几种结构形态：包涵体型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白

77、问答题  大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？

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本题答案：优点：大肠杆菌培养方
本题解析：试题答案优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。

78、问答题  试述5′RACE技术原理和方法。

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本题答案：PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3&pr
本题解析：试题答案PCR用于扩增代表mRNA转录物某一单位点与其3′或5′末端之间区域的部分cDNA称为快速扩增cDNA末端技术（RACE）。如果已知mRNA的一片段链内短序列，据此或设计基因特异引物，用原先存在的poly（A）尾（3′末端）或附加的同聚尾（5′末端）互补的序列做末端引物，就可以获得从未知末端直到已知区域的部分cDNA序列。为获得5′末端部分cDNA克隆需用基因特异引物，产物第一链产物，可用末端脱氧核苷酸转移酶及dATP加poly（A）尾。通过QT引物和反转录使用的上游基因特异引物生成第二链cDNA。

79、问答题  电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因，有何解决办法？

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本题答案：原因：电泳缓冲液的离子的富集作用；
解决方法
本题解析：试题答案原因：电泳缓冲液的离子的富集作用；
解决方法：
1.更换成新配置的电泳缓冲液；
2.把电泳槽中的缓冲液倒出混匀后再重新使用

80、单项选择题  下列关于限制酶反应的说法错误的是（）

A.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。
C.有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
E.BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

81、单项选择题  为什么使用限制性内切核酸酶对基因组DNA进行部分酶切？（）

A.为了产生平末端
B.为了产生黏末端
C.只切割一条链上的酶切位点，产生开环分子
D.可得到比完全酶切的片段略短的产物
E.可得到比完全酶切的片段略长的产物

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

82、问答题  基因工程诞生的理论基础是什么？

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本题答案：是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明
本题解析：试题答案是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。
理论上的三大发现：
①证实了DNA是遗传物质
②揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理
③遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定
技术上的三大发明：
①限制核酸内切酶的发现与DNA切割
②DNA连接酶的发现与DNA片段的连接
③基因工程载体的研究与应用

83、填空题  II型限制酶识别位点一般长度为（）个核苷酸对。

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本题答案：4~6
本题解析：试题答案4~6

84、填空题  限制性内切酶识别序列具有（），反向重复结构特征。

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本题答案：旋转对称
本题解析：试题答案旋转对称

85、多项选择题  通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（）

A.限制酶只切割两个变异等位基因中的一个
B.限制酶位点可作为遗传标记
C.它不依赖变异的等位基因的产物的功能
D.不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异
E.同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同

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本题答案：B, C
本题解析：暂无解析

86、单项选择题  II类限制酶反应中必须的阳离子是（）

A.Na+
B.Ca2+
C.Mg2+
D.Zn2+
E.Mn2+

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

87、填空题  限制酶识别序列为（）个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

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本题答案：n
本题解析：试题答案n

88、问答题  何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识DNA序列的结构特点。

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本题答案：限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异性核苷
本题解析：试题答案限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异性核苷酸序列并由此特异切割DNA双链结构的水解酶.是在DNA分子内部切割，水解磷酸二酯键的核酸内切酶。能够识别特异的DNA碱基序列，DNA碱基序列往往呈回文对称结构；并具有特异切割位点。

89、多项选择题  下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（）

A.高纯度DNA。
B.载体与目的基因摩尔数之比为1：1。
C.载体与目的基因摩尔数之比为1：3~5。
D.连接反应体系中DNA浓度较高。
E.连接反应体系中DNA浓度较低。

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本题答案：A, C, D
本题解析：暂无解析

90、问答题  什么是基因诊断？基因诊断中常用的方法有哪些？试简述其中一种方法的原理。

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本题答案：基因诊断是指用分子生物学的技术对引起疾病的原因&mda
本题解析：试题答案基因诊断是指用分子生物学的技术对引起疾病的原因——遗传基因、致病微生物和寄生虫，以及某些恶性肿瘤在基因水平上进行病原学和细胞遗传基因的检测和分析。基因诊断中常用的方法有核酸分子杂交、PCR、DNA芯片技术、限制酶酶谱分析和DNA序列测定等。
核酸分子杂交是基因诊断的最基本的方法之一。它的基本原理是：互补的核酸单链能够在一定条件下结合成双链，即能够进行杂交。它不仅能在DNA和DNA之间进行，也能在DNA和RNA之间进行。因此，当用一段已知基因的核酸序列作探针，与变性后的单链基因组DNA接触时，如果两者的碱基完全配对，它们即互补地结合成双链，从而表明被测基因组DNA中含有已知的基因序列。

91、单项选择题  在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（）

A.I类限制酶
B.II类限制酶
C.III类限制酶
D.核酸内切酶
E.RNAase

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

92、问答题  表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？

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本题答案：表达载体：启动子；终止子；核糖体结合位点（SD序列）；
本题解析：试题答案表达载体：启动子；终止子；核糖体结合位点（SD序列）；筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点
克隆载体：筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点

93、单项选择题  构建基因文库一般使用的载体是（） I质粒；IIλ-DNA；IIICosmid

A、I
B、II
C、III
D、II+III
E、I+II+III

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

94、单项选择题  下列与RFLP相关的一条是（）

A.不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。
B.两种物种个体间的限制性图谱。
C.同一个体等位基因的限制性图谱。
D.同一物种不同个体的限制性图谱。
E.非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

95、问答题  什么是SD序列？

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本题答案：原核生物起始密码子AUG上游7~12个核苷酸的保守区，
本题解析：试题答案原核生物起始密码子AUG上游7~12个核苷酸的保守区，能与16srRNA的3’端反向互补

96、问答题  载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？

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本题答案：基因工程中常用的载体（vector）主要包括质粒（pl
本题解析：试题答案基因工程中常用的载体（vector）主要包括质粒（plasmiD.、噬菌体（phagE.和病毒（virus）三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。

97、名词解释  cDNA文库

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本题答案：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载
本题解析：试题答案是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。

98、多项选择题  酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（）

A.储存温度不合适
B.稀释后储存
C.储存缓冲液不合适
D.分装后储存
E.储存缓冲液中蛋白浓度低

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本题答案：A, B, C, E
本题解析：暂无解析

99、多项选择题  如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（）

A.限制酶失活
B.限制酶的星号活性
C.有其他限制酶污染
D.有抑制剂存在
E.测试DNA中有其他DNA污染

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本题答案：B, C, E
本题解析：暂无解析

100、问答题  用酚/氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚/氯仿中加入少许异戊醇，原因是什么？

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本题答案：异戊醇是一种有机试剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产
本题解析：试题答案异戊醇是一种有机试剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相使离心后的上层含DNA的水相，中间的性变蛋白质相及下层有机溶剂相维持稳定。

101、问答题  什么是基因组文库（genomiclibrary）？它同遗传学上的基因库有什么不同？

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本题答案：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基
本题解析：试题答案基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。包括下列过程：高分子质量染色体DNA的制备；体外重组连接；将重组DNA导入寄主细胞并扩增；筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库（genepoo1）是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。

102、单项选择题  基因工程操作的三大基本元件是：（I供体II受体III载体IV抗体V配体）（）

A.I+II+III
B.I+III+IV
C.II+III+IV
D.II+IV+V

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

103、问答题  如何用PCR制备突变DNA分子？

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本题答案：可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可
本题解析：试题答案可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可以是碱基替代、插入或者缺失。为了在靶基因特定位点导入突变，在PCR引物设计时，将一条引物设计成为与靶序列互补但在预期位点作碱基替换或缺失。在引物中的诱发突变序列应该位于引物的5′端或在引物中间部位，但绝不能位于3′端。诱变引物的3′区域（至少6～10个碱基）必须与靶DNA完全互补以使引物与模板的退火完全而且Taq酶能延伸引物。
PCR反应先在低特异性环境下反应5～10个循环以使错配得以发生（即在松弛的温度下），一旦少量的突变模板产生，就可以作为靶序列与引物完全互补。扩增反应的终产物即是所需的含有突变的扩增DNA分子，然后通过克隆和序列分析进行确证。

104、单项选择题  λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（）

A.小于λ噬菌体DNA的50%
B.小于噬菌体DNA的75%
C.大于λ噬菌体DNA的105%
D.为λ噬菌体DNA的75%～105%

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

105、问答题  原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？

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本题答案：1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平
本题解析：试题答案1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控
原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。
2）真核生物基因表达的特点：
1．基因组DNA存在的形式与原核生物不同；
2．真核生物中转录和翻译分开进行；
3．基因表达具有细胞特异性或组织特异性；
4．真核基因表达的调控在多个水平上进行：DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控；

106、单项选择题  下列获取目的基因的方法中需要模板链是（）

A.从基因文库中获取目的基因
B.利用PCR技术扩增目的基因
C.反转录法
D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

107、问答题  影响核酸保存的关键因素是什么？怎样保存核酸制品？

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本题答案：关键因素：
①保存液的酸碱度
②保
本题解析：试题答案关键因素：
①保存液的酸碱度
②保存温度
保存方法：
①一般保存可用浓盐液，NaCL-柠檬酸缓冲液或0.1mol/L醋酸缓冲液。
②对DNA来说，在pH4～11的范围分子的碱基较稳定，超出此范围DNA易变性或降解，低温、稀碱下保存DNA及低温下保存RNA均较稳定。
③固态核酸通常在0℃以上低温干燥保存即可。

108、填空题  DNA带（）电荷，在电场中从负极向正极移动。

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本题答案：负
本题解析：试题答案负

109、问答题  简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。

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本题答案：同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末
本题解析：试题答案同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶
（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。）

110、单项选择题  Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（）

A.dGTP
B.dATP
C.dCTP
D.dTTP

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

111、单项选择题  第二代基因工程是指（）

A、途径工程
B、代谢工程
C、蛋白质工程
D、RNA基因工程
E、细胞器基因工程

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

112、单项选择题  用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）

A.染色体DNA断成了碎片
B.染色体DNA分子量大，而不能释放
C.染色体变性后来不及复性
D.染色体未同蛋白质分开而沉淀

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

113、单项选择题  在分离DNA时，异戊醇的作用是（）

A.使蛋白质脱水
B.使DNA脱水
C.帮助DNA进入水相；
D.减少气泡，促进分相

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

114、单项选择题  下面关于限制性核酸内切酶的表示方法中，正确的一项是（）。

A.Sau3AI
B.E.coRI
C.hindIII
D.Sau3AI

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

115、问答题  简述λ噬菌体载体的克隆原理及一般步骤？

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本题答案：原理：载体和外源DNA经酶切后，外源DNA片段插入到载
本题解析：试题答案原理：载体和外源DNA经酶切后，外源DNA片段插入到载体的适当位置，或置换载体的填充片段。连接形成重组子在体外噬菌体蛋白作用下，包装形成噬菌体颗粒，通过噬菌体颗粒感染大肠杆菌将重组DNA注射到宿主中，经过裂解生长，可增殖重组DNA。
步骤：
①通过裂解过程增殖载体
②回收、分离纯化载体
③载体与外源DNA的酶切
④外源DNA与载体的连接
⑤重组噬菌体的体外包装
⑥包装噬菌体颗粒感染宿主
⑦筛选。

116、问答题  试述基因工程的主要研究内容。

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本题答案：1）、目的基因的分离
2）、DNA的体外重组
本题解析：试题答案1）、目的基因的分离
2）、DNA的体外重组（载体、受体系统等）
3）、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选
4）、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。

117、单项选择题  下面哪一种不是产生星号活性的主要原因？（）

A.甘油含量过高
B.反应体系中含有有机溶剂
C.含有非Mg2+的二价阳离子
D.酶切反应时酶浓度过低

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

118、单项选择题  限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（）

A.识别和切割序列发生变化。
B.切割活性大大提高。 www.91eXam.org
C.识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E.只能部分切割DNA。

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

119、单项选择题  双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于（）

A、DNA的聚合反应
B、DNA的连接反应
C、DNA的降解反应
D、特殊的DNA连接酶
E、聚合单体2’和5’位的脱氧

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

120、单项选择题  CDNA、法获得目的基因的优点是（）

A、成功率高
B、不含内含子
C、操作简便
D、表达产物可以分泌

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

121、问答题  列举质粒载体必须具备的4个基本特性。

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本题答案：（1）独立复制；
（2）有选择标记；
本题解析：试题答案（1）独立复制；
（2）有选择标记；
（3）有独特的酶切位点；
（4）能转化但不扩散。

122、名词解释  Shuttle plasmid vector:穿梭质粒载体

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本题答案：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而
本题解析：试题答案指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。

123、名词解释  同尾酶

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本题答案：某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端
本题解析：试题答案某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶

124、单项选择题  关于cDNA的不正确的提法是（）

A.同mRNA互补的单链RNA
B.同mRNA互补的含有内含子的DNA
C.以mRNA为模板合成的双链RNA
D.以上都不正确

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本题答案：C
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125、单项选择题  用SDS-酚来抽提DNA时，SDS的浓度是十分重要的，当SDS的浓度为0.1%时（）

A.只能将DNA抽提到水相
B.只能将RNA抽提到水相
C.可将DNA、RNA一起抽提到水相
D.DNA和RNA都不能进入水相

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本题答案：B
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126、单项选择题  有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（）

A.TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性
B.便于排除错误碱基的掺入
C.易于退火
D.易于重组连接

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本题答案：A
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127、名词解释  基因探针（probe）

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本题答案：就是一段与目的基因DNA互补的带有能检测标记物的特异核
本题解析：试题答案就是一段与目的基因DNA互补的带有能检测标记物的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。

128、单项选择题  克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因）（）

A.I+II
B.I+III
C.II+III
D.I+II+III

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本题答案：D
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129、多项选择题  限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（）

A.限制酶无活性
B.存在抑制剂如SDS，EDTA
C.DNA不纯
D.缓冲液组成不合适
E.DNA甲基化

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

130、单项选择题  多数限制酶消化DNA的最佳温度是（）

A.37℃
B.30℃
C.25℃
D.16℃
E.33℃

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

131、单项选择题  大肠杆菌出现感受态的生理期是（）

A.潜伏期
B.对数期
C.对数后期
D.平衡期
E.衰亡期

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本题答案：B
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132、问答题  试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。

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本题答案：1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。本题解析：试题答案1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好。
2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。
3、足够多的载体和插入片段是最重要的。
4、平端的连接对于离子浓度很敏感
5、尽可能缩小连接反应的体积
6、建议放在四度冰箱连接两天效率更高比14度好

133、问答题  什么是扣除杂交？其基本原理是什么？

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本题答案：概念：将含目标基因的组织或器官的mRNA群体作为待测样
本题解析：试题答案概念：将含目标基因的组织或器官的mRNA群体作为待测样本（Tester），将基因表达谱相似或相近但不含目标基因的组织或器官的mRNA群体作为对照样本（Driver），将Tester和Driver的cDNA进行多次杂交，去掉在二者之间都表达的基因，而保留二者之间差异表达的基因。
原理：一种细胞的总mRNA反转录制备的cDNA与另一细胞的总mRNA混合形成cDNA-RNA杂交分子通过羟基磷灰石柱被扣除，未杂交的单链cDNA流出柱子外，其对应的低丰度mRNA得以克隆。

134、多项选择题  限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（）

A.限制酶去除不完全
B.平端连接
C.核酸外切酶污染
D.连接反应温度低于16℃
E.从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类

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本题答案：A, B, C, E
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135、问答题  简述包含体形成的原因和包含体蛋白复性的主要步骤。

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本题答案：重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体
本题解析：试题答案重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体总蛋白量10%时，会在细胞内与细菌杂蛋白、核酸等成分聚集成没有生物活性的直径0.1-0.3μm的固体颗粒，这种不溶性聚合体即包含体（inclusion body）。
生成包含体的原因可能有是蛋白质合成速度太快，多肽链相互缠绕，影响了多肽链的正确折叠，导致疏水基团外露等。
（包含体的形成有利于防止蛋白酶对表达蛋白的降解，并且非常有利于分离表达产物。但包含体形成后，表达蛋白不具有生物活性，因此必须溶解包含体并对表达蛋白进行复性。）
包含体复性即从伸展态－中间体－后期中间体－天然态的过程，操作步骤一般为用超声波、匀浆等使菌体破碎后，离心得到包含体－加入强蛋白质变性剂如6～8mol／L盐酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含体－用透析、稀释和超滤复性法等等方法使之正确折叠。

136、单项选择题  根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成（）

A、2大类
B、3大类
C、4大类
D、5大类

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本题答案：B
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137、名词解释  S-D Sequence:S-D序列

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本题答案：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始
本题解析：试题答案在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称S-D序列。

138、单项选择题  分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（）

A.单酶切产物
B.双酶切产物
C.同裂酶产物
D.PCR产物
E.酶切后形成的平末端产物

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本题答案：D
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139、单项选择题  粘末端连接的优点是操作简便且（）

A.可产生新的酶切位点
B.载体易自身环化
C.易于回收片段
D.具有方向性
E.选时更简便

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本题答案：C
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140、问答题  说明Sanger DNA测序法的 原理。

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本题答案：SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：本题解析：试题答案SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：
（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端向3’端聚合；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

141、多项选择题  PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（）

A.AmPr
B.ori复制子
C.LacZ标记
D.多克隆位点

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本题答案：A, B, C, D
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142、问答题  说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。

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本题答案：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株
本题解析：试题答案限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号.基本原则：3-4个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：
（1）取种名的第二个字母，斜体小写；
（2）若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替.第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体.顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I，Ⅱ，Ⅲ，…等，用正体.

143、问答题  大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？

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本题答案：优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学
本题解析：试题答案优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。

144、单项选择题  的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是（）

A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性
B．有利于对目的基因是否导入进行检测
C．增加质粒分子的分子量
D．便于与外源基因连接

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本题答案：B
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145、单项选择题  下列有关基因的叙述，错误的是（）

A、蛋白质是基因表达的唯一产物
B、基因是DNA链上具有编码功能的片段
C、基因也可以是RNA
D、基因突变不一定导致其表达产物改变结构
E、基因具有方向性

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本题答案：A
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146、单项选择题  关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，（）项不是主要原因。

A.底物（模板）过剩
B.dNTP的大量消耗
C.产物的聚集
D.非特异性产物的竞争性抑制

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本题答案：B
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147、问答题  什么是基因组文库（genomiclibrary）？构建基因组文库，涉及哪些基本过程？它同遗传学上的基因库有什么不同？

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本题答案：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基
本题解析：试题答案基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：
（1）高分子量染色体DNA的制备；
（2）体外重组连接；
（3）包装蛋白的制备；
（4）重组体的体外包装；
（5）将重组DNA导人寄主细胞；
（6）筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库（genepool）是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。

148、名词解释  星号活性

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本题答案：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测
本题解析：试题答案限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。）克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA样品的重新处理等。

149、单项选择题  下列关于同裂酶的叙述错误的是（）

A.是从不同菌种分离到的不同的酶，也称异源同工酶。
B.它们的识别序列完全相同。
C.它们的切割方式可以相同，也可以不同。
D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
E.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

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本题答案：B
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150、问答题  什么是限制性核酸内切酶？第二型限制酶有何特点？

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本题答案：限制性核酸内切酶（限制酶，restriction en
本题解析：试题答案限制性核酸内切酶（限制酶，restriction endonuclease）是一类能够识别双链DNA分子中的某些特定核苷酸序列，并对DNA分子进行切割的核酸内切酶。
第二型限制酶特点：2亚基，单辅因子；识别序列是由4、5、6或7个核苷酸组成的特定核苷酸序列，识别位点双重旋转对称结构，切割与识别位点相同或相近。分子量较小，仅需Mg2+作为催化反应的辅助因子，不需ATP。

151、单项选择题  用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。

A.Southem印迹杂交
B.Northem印迹杂交
C.Western印迹
D.原位菌落杂交

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本题答案：C
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152、单项选择题  某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有（）

A.4个
B.3个
C.2个
D.至少2个

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本题答案：D
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153、多项选择题  DNA片段重组连接可用下列哪些方法（）

A.平末端连接
B.粘末端连接
C.加接头连接
D.同聚尾连接
E.T载体连接

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本题答案：A, B, C, D, E
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154、单项选择题  在翻译过程中．mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是（）

A、启动子
B、调节基因
C、SD序列
D、终止子

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本题答案：C
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155、问答题  常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？

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本题答案：外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重
本题解析：试题答案外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。

156、单项选择题  下列五个DNA片段中含有回文结构的是（）

A.GAAACTGCTTTGAC
B.GAAACTGGAAACTG
C.GAAACTGGTCAAAG
D.GAAACTGCAGTTTC

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本题答案：D
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157、多项选择题  下列关于限制酶的叙述正确的是（）

A.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。
B.限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
C.如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。
D.已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。
E.能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

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本题答案：B, C, D
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158、单项选择题  有关基因工程的叙述中，错误的是（）

A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B、限制性内切酶用于目的基因的获得
C、目的基因须由运载体导入受体细胞
D、人工合成目的基因不用限制性内切酶

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本题答案：A
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159、单项选择题  BamHI、XbaI、BglII的识别位点分别是：G↓GATCC、T↓CTAGA、A↓GATCT，哪些酶切结果可产生互补的末端？（）

A.以上几种酶切结果产生的末端都可互补
B.产生的末端都不能互补
C.仅BamHI与BglII的酶切末端互补
D.仅BamHI与XbaI的酶切末端互补
E.仅XbaI与BglII的酶切末端互补

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本题答案：C
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160、问答题  什么是蓝白斑筛选法？

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本题答案：这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体
本题解析：试题答案这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷（X-gal）平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac（或lac基因部分被取代）后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷（X-gal）平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。

161、问答题  用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间？

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本题答案：酚使蛋白分子间脱水而变性，变性蛋白的密度比水大，但比酚
本题解析：试题答案酚使蛋白分子间脱水而变性，变性蛋白的密度比水大，但比酚小，因此停在中间。

162、问答题  什么是原位菌落杂交（Colony Hybridization）？

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本题答案：将生长在或影印在微孔滤膜上的菌落（或噬菌斑）原位溶菌，
本题解析：试题答案将生长在或影印在微孔滤膜上的菌落（或噬菌斑）原位溶菌，原位进行DNA变性并原位固定在滤膜上，然后用放射性标记的探针同固定了的DNA进行杂交，经放射自显影后，确定哪一个菌落含有重组的DNA分子，再从参比平板上选取重组体。

163、单项选择题  下列关于平末端连接的说法正确的是（）

A.同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。
B.加入凝聚剂PEG8000可促进平末端连接。
C.平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。
D.平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。
E.平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。

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本题答案：B
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164、多项选择题  在DNA重组连接时，常采用连接头连接（linker ligation），其作用是（）

A．引入某些限制酶切位点。
B.人工构建载体。
C．增加调控元件。
D.调整阅读框。
E．通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。

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本题答案：A, B, C, E
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165、名词解释  Cosmid vector:黏粒载体

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本题答案：含有cos位点的质粒载体。
本题解析：试题答案含有cos位点的质粒载体。

166、名词解释  限制性核酸内切酶

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本题答案：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。
本题解析：试题答案是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。

167、问答题  什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？

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本题答案：在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，
本题解析：试题答案在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种活性称星活性。产生Star活性的因素高浓度甘油，碱性pH，存在Mn2+，低离子强度，低盐浓度，低pH

168、多项选择题  有关PCR的描述下列哪项正确（）

A.polymerase chainre action的字首缩写
B.1993年获诺贝尔化学奖
C.已广泛的应用于医学各学科
D.能够准确对扩增模板定量
E.以上都对

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本题答案：A, B, C
本题解析：暂无解析

169、名词解释  RACE

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本题答案：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以m
本题解析：试题答案是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3，或5，端之间未知序列的方法

170、问答题  什么是接头连接法？

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本题答案：人工合成或来源于某一质粒的小段含某限制酶位点的DNA与
本题解析：试题答案人工合成或来源于某一质粒的小段含某限制酶位点的DNA与载体或外源DNA分子相连，这样便在载体或外源DNA上制造出新的酶切位点，即接头连接。

171、问答题  杂交液的成分是什么？

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本题答案：反应液中每增加1%的甲酰胺浓度，tm值可降低0.72℃
本题解析：试题答案反应液中每增加1%的甲酰胺浓度，tm值可降低0.72℃。6M尿素，降低Tm约30℃惰性多聚体可用来促进250个碱基以上的探针的杂交率。对单链探针可增加3倍，而对双链探针、随机剪切或随机引物标记的探针可增加高达100倍。

172、名词解释  转化子（transformant）

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本题答案：通过转化方式而形成的杂种后代。
本题解析：试题答案通过转化方式而形成的杂种后代。

173、填空题  用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整的植物组织或者细胞中，这一方法称为（）。

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本题答案：基因枪法
本题解析：试题答案基因枪法

174、单项选择题  基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是()

A.人工合成目的基因
B.目的基因与运载体结合
C.将目的基因导入受体细胞
D.目的基因的检测表达

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本题答案：C
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175、单项选择题  若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入（）

A、半乳糖
B、葡萄糖
C、蔗糖
D、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）
E、异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

176、多项选择题  酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（）

A.储存温度不合适
B.稀释后储存
C.储存缓冲液不合适
D.分装后储存
E.储存缓冲液中蛋白浓度低

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本题答案：A, B, C, E
本题解析：暂无解析

177、单项选择题  生物工程的上游技术是（）

A.基因工程及分离工程
B.基因工程及发酵工程
C.基因工程及细胞工程
D.基因工程及蛋白质工程

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

178、问答题  重组DNA技术常包括哪些基本步骤？

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本题答案：①获得目的基因；
②与克隆载体连接，形成新的
本题解析：试题答案①获得目的基因；
②与克隆载体连接，形成新的重组DNA分子；
③用重组DNA分子转化受体细胞，并能在受体细胞中复制和遗传；
④对转化子筛选和鉴定。在具体工作中选择哪条技术路线；
⑤对获得外源基因的细胞或生物体通过培养，获得所需的遗传性状或表达出所需要的产物。主要取决于基因的来源、基因本身的性质和该项遗传工程的目的。

179、问答题  基因工程操作的基本步骤是什么？

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本题答案：①施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（
本题解析：试题答案①施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA和载体分子切开。（切）
②目的基因与载体DNA的体外重组，形成重组DNA分子。（接）
③把重组的DNA分子引入受体细胞，并建立起无性繁殖系。（转和扩）
④筛选出所需要的无性繁殖系，并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、正确表达。（检）

180、单项选择题  RFLP形成的原因是（）

A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
B.使用不同的限制性内切酶进行切割。
C.杂交时使用不同的探针。
D.每种染色体存在两条。
E.提取不同的染色体DNA酶切。

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本题答案：A
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181、问答题  怎样将一个平末端DNA片段插入到Eco RI限制位点中去？

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本题答案：化学合成一些长来源:91考试网 91Exam.org为10bp含有Eco RI识别位点的短的
本题解析：试题答案化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生Eco RI的单链末端。这种片段就可以插入到任何Eco RI的限制性内切酶位点中。

182、多项选择题  下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（）

A.其核心是利用末端转移酶的功能，将载体和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。
B.不易自身环化。
C.连接效率高
D.适用于CDNA克隆
E.可能会产生某种限制酶切位点。

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本题答案：A, B, C, D, E
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183、问答题  某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因？

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本题答案：答盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。
本题解析：试题答案答盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。

184、单项选择题  下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法（）

A．基因枪法
B．显微注射法
C．农杆菌转化法
D．花粉管通道法

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

185、单项选择题  RFLP产生自（）。

A.使用不同的限制性内切核酸酶
B.每种类型的染色体有两条（二倍体）
C.DNA序列中碱基的随机变化
D.Southern印迹
E.不同探针的使用

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本题答案：C
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186、填空题  基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系称为（）。

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本题答案：表达系统
本题解析：试题答案表达系统

187、填空题  在制备感受态细胞时，为了提高转化率，常用冰冻的（）处理和短暂的42℃热击处理。

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本题答案：CaCl2
本题解析：试题答案CaCl2

188、问答题  启动子从转录模式上可分为哪两种？表达系统常选用哪一种？其机理是什么？

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本题答案：启动子从转录模式上分为：组成型启动子和诱导型启动子本题解析：试题答案启动子从转录模式上分为：组成型启动子和诱导型启动子
表达系统常选用诱导型启动子
机理：指在某些特定的物理或化学信号的刺激下，该种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平。

189、问答题  外源基因导入植物的方法主要有哪些？

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本题答案：物理方法：电击法、基因枪法（biolistiC.、显微
本题解析：试题答案物理方法：电击法、基因枪法（biolistiC.、显微注射法、微激光束法
化学方法：PEG介导法、脂质体介导法
生物学方法：农杆菌介导法、花粉管通道法

190、单项选择题  天然 PstI 限制性内切酶的来源是 （）

A、Bacillus  amyloliquefaciens
B、Escherichia   coli
C、Haemophilus   influenzae
D、Providencia   stuartii
E、Streptomyces   lividans

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

191、单项选择题  下列基因调控元件中属于反式调控元件的是（）

A、阻遏蛋白
B、启动子
C、操作子
D、终止子
E、增强子

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

192、单项选择题  关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。

A.由作用于同一DNA序列的两种酶构成
B.这一系统中的核酸酶都是II类限制性内切核酸酶
C.这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
D.不同的宿主系统具有不同的限制--修饰系统

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本题答案：B
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193、名词解释  限制性片段长度多态性（RFLP）

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本题答案：当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当
本题解析：试题答案当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶电泳区分，出现的这种DNA多态性称为限制性片段长度多态性。

194、单项选择题  识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（） 91ExaM.org

A.同工酶
B.同尾酶
C.同裂酶
D.同位酶

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本题答案：B
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195、问答题  限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？

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本题答案：⑴酶的纯度。
⑵DNA样品的纯度。
本题解析：试题答案⑴酶的纯度。
⑵DNA样品的纯度。
⑶DNA的甲基化程度。
⑷酶切反应的温度与时间。
⑸DNA分子的构型。
⑹限制性核酸内切酶的反应缓冲液。

196、多项选择题  如果DNA分子重组时，需要用平端连 91ExaM.org接，下列哪些方法可形成平末端（）。

A.3‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。
B.3‘突出的粘末端用核酸酶切平。
C.5‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。
D.5‘突出的粘末端用核酸酶切平。
E.利用切口为平末端的限制酶。

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本题答案：B, C, D, E
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197、多项选择题  pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（）

A.AmPr和Tetr
B.ori复制子
C.LacZ标记
D.多克隆位点

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本题答案：A, B, D
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198、单项选择题  下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（）

A.大肠杆菌－繁殖迅速
B.枯草杆菌－分泌机制健全
C.链霉菌－遗传稳定
D.酵母菌－表达产物具有真核性

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本题答案：C
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199、问答题  一般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？

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本题答案：超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA本题解析：试题答案超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA
在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：
超螺旋质粒DNA>线状质粒DNA>开环质粒DNA

200、单项选择题  生物工程的下游技术是（）

A.基因工程及分离工程
B.蛋白质工程及发酵工程
C.基因工程及蛋白质工程
D.分离工程及蛋白质工程

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本题答案：A
本题解析：暂无解析