1、问答题  为什么用原核表达系统表达真核生物的蛋白质时，克隆的真核基因不能来自基因组文库？真核基因应如何获得？

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本题答案：对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDN
本题解析：试题答案对真核细胞来说，从基因组DNA文库获得的基因与从cDNA文库获得的不同，基因组DNA文库所含的是带有含子和外显子的基因组基因，而从cDNA文库中获得的是已经过剪接、去除了内含子的cDNA。因为原核细胞不具有mRNA转录后加工系统，不能进行剪接、去除内含子等操作，所以
用原核表达系统表达真核生物的蛋白质时，克隆的真核基因不能来自基因组文库，应从cDNA文库中获得，或者通过提取mRNA后RT-PCR方法获得。

2、问答题  表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？

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本题答案：表达载体：启动子；终止子；核糖体结合位点（SD序列）；
本题解析：试题答案表达载体：启动子；终止子；核糖体结合位点（SD序列）；筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点
克隆载体：筛选标记；复制子（质粒拷贝数）；多克隆位点

3、单项选择题  天然 PstI 限制性内切酶的来源是 （）

A、Bacillus  amyloliquefaciens
B、Escherichia   coli
C、Haemophilus   influenzae
D、Providencia   stuartii
E、Streptomyces   lividans

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

4、单项选择题  珠江三角洲发展外向型经济最主要的合作伙伴是（）

A.港澳地区
B.台湾地区
C.东南亚地区
D.美国

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

5、多项选择题  重组连接时，反应体系必须的组分有（）

A.Mg2+
B.BSA
C.ATP
D.PO43-
E.EDTA

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本题答案：A, C
本题解析：暂无解析

6、名词解释  Probe：探针

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本题答案：指被标记物质标记了的核酸。
本题解析：试题答案指被标记物质标记了的核酸。

7、填空题  在翻译过程中，mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是（），另一个是（）。

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本题答案：起始密码AUG；SD序列
本题解析：试题答案起始密码AUG；SD序列

8、单项选择题  外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是（I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III表达产物易于亲和层析分离）（）

A.III
B.I+II
C.I+III
D.II+III

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

9、单项选择题  某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有（）

A.4个
B.3个
C.2个
D.至少2个

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

10、单项选择题  根据基因 工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是（）

A、基因诱变
B、分子克隆
C、DNA重组
D、遗传工程
E、基因无性繁殖

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

11、单项选择题  下列基因调控元件中属于反式调控元件的是（）

A、阻遏蛋白
B、启动子
C、操作子
D、终止子
E、增强子

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

12、问答题  试述基因工程的主要研究内容。

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本题答案：1）、目的基因的分离
2）、DNA的体外重组
本题解析：试题答案1）、目的基因的分离
2）、DNA的体外重组（载体、受体系统等）
3）、重组DNA分子转移到受体细胞及其筛选
4）、基因在受体细胞内的扩增、表达、检测及其分析。

13、单项选择题  下列关于平末端连接的说法正确的是（）

A.同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。
B.加入凝聚剂PEG8000可促进平末端连接。
C.平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。
D.平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。
E.平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

14、问答题  基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些？

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本题答案：切、接、转、增、筛（检）
本题解析：试题答案切、接、转、增、筛（检）

（1）切——获得DNA片段，取得目的基因；载体的选择与制备。
方法：从生物基因组中分离得到——基因组DNA——>酶切产物
从总RNA中分离得到mRNA，再逆转录得到cDNA
人工合成——化学合成；PCR（聚合酶链式反应）
（2）接——DNA片段和载体DNA在体外连接，形成重组子。
（3）转——将重组的DNA引入宿主细胞
方式：转化——某一基因型细胞从周围介质中吸收另一基因型细胞的DNA，而使其基因型和表型发生相应变化的现象；转染——除去蛋白质外壳的病毒核酸感染细胞或原生质体的过程；转导——用噬菌体做载体，将一个细胞的基因传递给另一个细胞的过程。还有显微注射等。
（4）增——培养已转化细胞，使目的基因在其中进行复制、扩增，并将其整合到受体细胞的基因组中。
（5）筛、检——重组子的筛选与鉴定。筛选和鉴定转化细胞，获得使外源基因高效表达的基因工程菌或细胞。

15、单项选择题  提高重组率的方法包括（I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间）（）

A.I+II
B.I+II+III
C.I+III+IV
D.II+III+IV

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本 www.91eXam.org题答案：A
本题解析：暂无解析

16、单项选择题  鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（）

A、原核细菌
B、酵母菌
C、丝状真菌
D、植物
E、人类

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本题答案：A
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17、名词解释  柯斯（C0S）质粒

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本题答案：带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA顺序的大肠
本题解析：试题答案带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA顺序的大肠杆菌质粒。

18、问答题  Southern杂交一般过程及影响杂交因素。

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本题答案：Southern杂交操作步骤：
（1）用限制
本题解析：试题答案Southern杂交操作步骤：
（1）用限制性内切酶酶切DNA，经凝胶电泳分离各酶切片段；
（2）转膜：将DNA片段转移到硝酸纤维素滤膜或尼龙膜上；
（3）预杂交：封阻滤膜上非特异性位点；
（4）杂交：让探针与同源DNA片段特异性结合；
（5）洗脱：去除非特异性结合的探针；
（6）自显影检查目的DNA所在的位置。
Southern杂交影响因子
1）、目的DNA在总DNA中所占的比例
2）、探针的大小和标记效率
3）、转移到滤膜上的DNA量
4）、探针与靶DNA的同源性

19、单项选择题  第二代基因工程是指（）

A、途径工程
B、代谢工程
C、蛋白质工程
D、RNA基因工程
E、细胞器基因工程

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本题答案：C
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20、多项选择题  下列关于II类限制酶的叙述正确的是（）

A.它既有内切酶的活性，也有外切酶活性
B.在特异位点对DNA进行切割
C.同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列
D.有些限制酶切割双链DNA产生粘末端
E.有些限制酶切割双链DNA产生平末端

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本题答案：B, C, D, E
本题解析：暂无解析

21、单项选择题  的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是（）

A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性
B．有利于对目的基因是否导入进行检测
C．增加质粒分子的分子量
D．便于与外源基因连接

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本题答案：B
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22、问答题  DNA诱变有哪些种类，各有何特点？

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本题答案：1、随机诱变：目的基因的DNA片段中引入了大量的序列多
本题解析：试题答案1、随机诱变：目的基因的DNA片段中引入了大量的序列多样性，得到的具体突变体可以是单点突变也可能是多点突变。
2、寡核苷酸介导的定点诱变：寡核苷酸介导的定点诱变可以在任何感兴趣的位置加上限制性内切酶位点；能够把一个自然条件下从未被发现的突变精确放置在靶基因的特定位置。
3、PCR介导的定点诱变：制作简单，突变体回收率高。
4、盒式诱变：寡核苷酸盒置换靶DNA区段，可以获得数量众多的突变体。

23、问答题  什么是基因文库？基因组文库与cDNA文库制备方法有何区别？

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本题答案：通过克隆技术将大分子DNA编码的全部或者绝大多数基因或
本题解析：试题答案通过克隆技术将大分子DNA编码的全部或者绝大多数基因或基因组进行扩增后的DNA片段混合物，称为基因文库或DNA文库、克隆库。分为基因组文库和cDNA文库两种。
基因组DNA文库的制备：从生物组织细胞提取出全部DNA，用物理方法（超声波、搅拌剪力等）或酶法（限制性核酸内切酶的不完全酶解）将DNA降解成预期大小的片段，然后将这些片段与适当的载体（常用噬菌体、粘粒或YAC载体）连接，转入受体细菌或细胞，这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子，而且可以繁殖扩增，许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆的集合体，就是基因组文库。
cDNA文库的制备：提取出组织细胞的全部mRNA，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，许多细胞一起组成包含着某细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。

24、单项选择题  大肠杆菌出现感受态的生理期是（）

A.潜伏期
B.对数期
C.对数后期
D.平衡期
E.衰亡期

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

25、问答题  载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？

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本题答案：基因工程中常用的载体（vector）主要包括质粒（pl
本题解析：试题答案基因工程中常用的载体（vector）主要包括质粒（plasmiD.、噬菌体（phagE.和病毒（virus）三大类。这些载体均需经人工构建，除去致病基因，并赋予一些新的功能，如有利于进行筛选的标志基因、单一的限制酶切点等。

26、名词解释  限制性核酸内切酶

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本题答案：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。
本题解析：试题答案是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。

27、单项选择题  某一重组DNA的载体部分有两个BamHI酶切位点。用BamHI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的BamHI酶切位点共有（）

A.4个
B.3个
C.1个
D.2个

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

28、多项选择题  构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（）

A.避免载体自身环化
B.提高连接效率
C.控制外源基因的插入方向
D.便于转化后的筛选
E.便于修改阅读框

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本题答案：A, B, C, D
本题解析：暂无解析

29、名词解释  RACE

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本题答案：是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以m
本题解析：试题答案是一种通过PCR进行cDNA末端快速克隆的技术，是以mRNA为模板反转录成cDNA第一链后用PCR技术扩增出某个特异位点到3，或5，端之间未知序列的方法

30、单项选择题  生物工程的上游技术是（）

A.基因工程及分离工程
B.基因工程及发酵工程
C.基因工程及细胞工程
D.基因工程及蛋白质工程

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

31、单项选择题  有关基因工程的叙述中，错误的是（）

A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B、限制性内切酶用于目的基因的获得
C、目的基因须由运载体导入受体细胞
D、人工合成目的基因不用限制性内切酶

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

32、问答题  小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？

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本题答案：最可能的原因：从细菌沉淀或从核酸沉淀中吸上清时注意不够
本题解析：试题答案最可能的原因：从细菌沉淀或从核酸沉淀中吸上清时注意不够，带了杂蛋白。其最根本的原因是因为细菌的细胞壁成分或核内某些蛋白质可能抑制限制酶活性。克服方法：用酚氯仿对溶液抽提；用离心柱层析法纯化DNA。

33、单项选择题  识别10碱基序列的限制酶，大约每隔（）进行一次切割。

A.4l0
B.104
C.2l0
D.102
E.24

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

34、单项选择题  下列关于同裂酶的叙述错误的是（）

A.是从不同菌种分离到的不同的酶，也称异源同工酶。
B.它们的识别序列完全相同。
C.它们的切割方式可以相同，也可以不同。
D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。
E.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

35、问答题  什么是原位菌落杂交（Colony Hybridization）？

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本题答案：将生长在或影印在微孔滤膜上的菌落（或噬菌斑）原位溶菌，
本题解析：试题答案将生 长在或影印在微孔滤膜上的菌落（或噬菌斑）原位溶菌，原位进行DNA变性并原位固定在滤膜上，然后用放射性标记的探针同固定了的DNA进行杂交，经放射自显影后，确定哪一个菌落含有重组的DNA分子，再从参比平板上选取重组体。

36、问答题  作为基因工程载体，其应具备哪些条件？

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本题答案：具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
本题解析：试题答案具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
具有合适的筛选标记；
具有较高的外源DNA的载装能力；
具有多克隆位点（MCS）；
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。

37、名词解释  cDNA library:cDNA文库

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本题答案：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载
本题解析：试题答案是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。

38、多项选择题  下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（）

A.其核心是利用末端转移酶的功能，将载体和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。
B.不易自身环化。
C.连接效率高
D.适用于CDNA克隆
E.可能会产生某种限制酶切位点。

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

39、填空题  基因工程所用的工具酶有（）；（）、连接酶、修饰酶四大酶类。

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本题答案：核酸酶、聚合酶
本题解析：试题答案核酸酶、聚合酶

40、问答题  生产限制性内切酶的细菌如何保护自己的DNA不被降解？

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本题答案：通过限制与修饰系统保护自己的DNA不被降解。几乎所有的
本题解析：试题答案通过限制与修饰系统保护自己的DNA不被降解。几乎所有的限制性内切核酸酶都能和识别甲基相同DNA位点的甲基转移酶共同作用，构成限制修饰系统。由于宿主自身DNA上的这些位点进行了修饰，限制酶就不能进行切割。由于外来的DNA在相应的碱基上没有被甲基化，宿主的限制酶通过对该位点的识别来分辨敌我，并将入侵的外来DNA分子降解掉。所以DNA限制作用和修饰作用为细胞提供了保护。

41、填空题  限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源（）的限制和对自身DNA的修饰来实现的。

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本题答案：DNA
本题解析：试题答案DNA

42、单项选择题  下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是（）

A、质粒是共价环状的双链DNA分子
B、天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列
C、质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制
D、松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增
E、质粒并非其宿主细胞生长所必需

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

43、名词解释  Shuttle plasmid vector:穿梭质粒载体

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本题答案：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而
本题解析：试题答案指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。

44、单项选择题  下列关于限制酶反应的说法错误的是（）

A.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。
B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。
C.有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。
D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。
E.BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

45、问答题  说明Sanger DNA测序法的原理。

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本题答案：SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：本题解析：试题答案SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：
（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端向3’端聚合；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

46、问答题  什么是接头连接法？

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本题答案：人工合成或来源于某一质粒的小段含某限制酶位点的DNA与
本题解析：试题答案人工合成或来源于某一质粒的小段含某限制酶位点的DNA与载体或外源DNA分子相连，这样便在载体或外源DNA上制造出新的酶切位点，即接头连接。

47、问答题  分析影响酶切的因素。

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本题答案：1）DNA的纯度：DNA等都会影响酶的活性。
本题解析：试题答案1）DNA的纯度：DNA等都会影响酶的活性。
2）DNA的甲基化程度：dam甲基化酶（修饰GATC中的A.；dcm甲基化酶（修饰CCA/TGG的C.。
3）温度：不同的限制性内切酶的最适反应温度不同。大多数是37oC，少数要求40-65oC。
4）缓冲液（Buffer）：是影响限制酶活性的重要因素。

48、问答题  一般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？

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本题答案：超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA本题解析：试题答案超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA
在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：
超螺旋质粒DNA>线状质粒DNA>开环质粒DNA

49、填空题  受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许有外源DNA的载体分子通过，这种细胞称为（）。

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本题答案：感受态细胞
本题解析：试题答案感受态细胞

50、问答题  为什么反转录酶在聚合反应中会出错？

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本题答案：因为反转录酶无3′→5&prim
本题解析：试题答案因为反转录酶无3′→5′外切酶校正作用，聚合反应往往出错。在高浓度的dNTP和Mn2+存在时错误率为1/500b。

51、单项选择题  关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，（）项不是主要原因。

A.底物（模板）过剩
B.dNTP的大量消耗
C.产物的聚集
D.非特异性产物的竞争性抑制

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

52、单项选择题  质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（）①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”

A.①③⑤⑦
B.②④⑥
C.①③⑥⑦
D.②③⑥⑦

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

53、单项选择题  识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（）

A.同工酶
B.同尾酶
C.同裂酶
D.同位酶

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

54、单项选择题  下列获取目的基因的方法中需要模板链是（）

A.从基因文库中获取目的基因
B.利用PCR技术扩增目的基因
C.反转录法
D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

55、问答题  怎样将一个平末端的DNA片段插入到EcoRI的限制位点中去？

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本题答案：可以化学合成一个连接子（linker），即一段长为l0
本题解析：试题答案可以化学合成一个连接子（linker），即一段长为l0bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生EcoRI的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性核酸内切酶位点中。

56、问答题  如何用PCR制备突变DNA分子？

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本题答案：可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可
本题解析：试题答案可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可以是碱基替代、插入或者缺失。为了在靶基因特定位点导入突变，在PCR引物设计时，将一条引物设计成为与靶序列互补但在预期位点作碱基替换或缺失。在引物中的诱发突变序列应该位于引物的5′端或在引物中间部位，但绝不能位于3′端。诱变引物的3′区域（至少6～10个碱基）必须与靶DNA完全互补以使引物与模板的退火完全而且Taq酶能延伸引物。
PCR反应先在低特异性环境下反应5～10个循环以使错配得以发生（即在松弛的温度下），一旦少量的突变模板产生，就可以作为靶序列与引物完全互补。扩增反应的终产物即是所需的含有突变的扩增DNA分子，然后通过克隆和序列分析进行确证。

57、单项选择题  为什么使用限制性内切核酸酶对基因组DNA进行部分酶切？（）

A.为了产生平末端
B.为了产生黏末端
C.只切割一条链上的酶切位点，产生开环分子
D.可得到比完全酶切的片段略短的产物
E.可得到比完全酶切的片段略长的产物

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

58、问答题  按适当的顺序，列出将一种mRNA的cDNA克隆到表达载体所用到的酶有哪些？

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本题答案：1、反转录酶以mRNA为模板复制出单链cDNA；本题解析：试题答案1、反转录酶以mRNA为模板复制出单链cDNA；
2、DNA聚合酶以单链cDNA为模板合成双链DNA；
3、S1核酸酶切割双链DNA形成平末端；
4、用限制性内切酶切割载体；
5、用DNA连接酶将cDNA插入载体。

59、单项选择题  利用毛细管作用原理，将凝胶电泳分离后的DNA片段转移至硝酸纤维素膜上并根据核酸杂交原理进行分析的技术是（）

A、Western印迹转移技术
B、Northern印迹转移技术
C、基因的表现型分析法
D、Southern印迹转移技术

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

60、填空题  用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整的植物组织或者细胞中，这一方法称为（）。

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本题答案：基因枪法
本题解析：试题答案基因枪法

61、单项选择题  包涵体是一种（）

A、受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒
B、大肠杆菌的亚细胞结构
C、噬菌体或病毒DNA的体外包装颗粒
D、用于转化动物细胞的脂质体
E、外源基因表达产物的混合物

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

62、填空题  限制性内切酶识别序列具有（），反向重复结构特征。

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本题答案：旋转对称
本题解析：试题答案旋转对称

63、单项选择题  下列属于获取目的基因的方法的是（） ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录⑥人工合成

A.①②③⑤
B.①②⑤⑥
C.①②③④
D.①②④⑥

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

64、填空题  限制酶识别序列为（）个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

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本题答案：n
本题解析：试题答案n

65、问答题  如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记？

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本题答案：首先利用T4DNA聚合酶的3’→
本题解析：试题答案首先利用T4DNA聚合酶的3’→5’外切核酸酶活性在缺乏dNTP的条件下切割dsDNA（双链DNA.，产生5‘突出端，然后加入放射性标记的dNTP，利用T4DNA聚合酶的5’→3’合成酶的活性进行填补合成，得到两端的3’端都是带标记的dsDNA。如果被标记的dsDNA中有限制性内切酶的内切位点，则可以得到两段放射性标记的探针。

66、问答题  何谓接头连接法？

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本题答案：将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA分子（在这一
本题解析：试题答案将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA分子（在这一小段DNA分子上有某种限制性内切核酸酶的识别序列），加到载体或外源DNA的分子上，这样便在载体DNA和外源DNA上制造出新的酶切点。把这一小段含有酶切点的DNA分子称为连接器分子，这种方法称为接头连接法。

67、问答题  基因工程诞生的理论基础是什么？

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本题答案：是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明
本题解析：试题答案是现代分子生物学领域理论上的三大发现和技术上的三大发明。
理论上的三大发现：
①证实了DNA是遗传物质
②揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制机理
③遗传密码的破译和遗传信息传递方式的确定
技术上的三大发明：
①限制核酸内切酶的发现与DNA切割
②DNA连接酶的发现与DNA片段的连接
③基因工程载体的研究与应用

68、问答题  在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

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本题答案：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓
本题解析：试题答案目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。

69、单项选择题  RFLP产生自（）。

A.使用不同的限制性内切核酸酶
B.每种类型的染色体有两条（二倍体）
C.DNA序列中碱基的随机变化
D.Southern印迹
E.不同探针的使用

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

70、单项选择题  T4-D、NA、连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段D、NA、片段连接在一起，其底物的关键基团是（）

A、2’-OH和5’–P
B、2’-OH和3’-P
C、3’-OH和2’–P
D、5’-OH和3’-P

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

71、单项选择题  分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（）

A.单酶切产物
B.双酶切产物
C.同裂酶产物
D.PCR产物
E.酶切后形成的平末端产物

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

72、单项选择题  下列各组专业术语中，含义最为接近的是（）

A、终止子与终止密码子
B、基因表达与基因转译
C、D、NA、退火与D、NA、复性
D、重组子与转化子

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

73、问答题  什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？

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本题答案：在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，
本题解析：试题答案在非最适合的条件下酶的识别特异性降低，产生非特异性带，这种活性称星活性。产生Star活性的因素高浓度甘油，碱性pH，存在Mn2+，低离子强度，低盐浓度，低pH

74、问答题  PCR技术主要应用在哪些领域？

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本题答案：①核酸基础研究
②序列分析
③检测基
本题解析：试题答案①核酸基础研究
②序列分析
③检测基因表达
④从cDNA文库中放大特定序列
⑤研究已知片段邻近基因或未知DNA片段
⑥进化分析
⑦医学应用
⑧分析生物学证据
⑨性别控制
⑩转基因检测。

75、问答题  电泳的指示剂和染色剂有何区别，各自的作用是什么？

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本题答案：指示剂一定要在电泳前加入，指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗
本题解析：试题答案指示剂一定要在电泳前加入，指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成载样缓冲液；（一般为：溴酚兰，二甲苯青）
作用：
①预知电泳的速率及方向；
②使样品呈现颜色，便于加样；
③一些高浓度蔗糖或其它物质增加DNA的密度，可以防止DNA的扩散
染色剂即可以在电泳前加入样液，又可以电泳后再对凝胶染色；（溴化已锭[EB]、硝酸银、Goldview染料）
作用：呈现出核酸电泳后的带型。

76、问答题  当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？

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本题答案：要避免星活性及部分酶切。
（1）先用低盐缓冲
本题解析：试题答案要避免星活性及部分酶切。
（1）先用低盐缓冲液中活性最高的酶切，再补盐和第二种酶；
（2）用一种酶消化后，以酚：氯仿：异戊醇抽提，再经乙醇沉淀，将DNA重新溶解与适合第二种酶的缓冲液，加第二种酶消化；
（3）先低温酶，后高温酶；
（4）使用通用缓冲液。

77、多项选择题  如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（）

A.限制酶失活
B.限制酶的星号活性
C.有其他限制酶污染
D.有抑制剂存在
E.测试DNA中有其他DNA污染

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本题答案：B, C, E
本题解析：暂无解析

78、名词解释  基因探针（probe）

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本题答案：就是一段与目的基因DNA互补的带有能检测标记物的特异核
本题解析：试题答案就是一段与目的基因DNA互补的带有能检测标记物的特异核苷酸序列，它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。

79、单项选择题  基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是()

A.人工合成目的基因
B.目的基因与运载体结合
C.将目的基因导入受体细胞
D.目的基因的检测表达

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

80、单项选择题  变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是（）

A.氧化物可使DNA的磷酸二酯键断裂
B.氧化物同DNA形成复合物
C.氧化物会改变pH值
D.氧化物在DNA分离后不易除去

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

81、问答题  克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？

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本题答案：表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类
本题解析：试题答案表达蛋白按溶解特性通常包括：不溶性蛋白和可溶性蛋白两类，具体包括如下几种结构形态：包涵体型蛋白、融合型蛋白、分泌型蛋白

82、单项选择题  下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法（）

A．基因枪法
B．显微注射法
C．农杆菌转化法
D．花粉管通道法

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

83、问答题  合成cDNA第二链的主要策略有哪些？

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本题答案：①自身引导合成法
②置换合成法
③
本题解析：试题答案①自身引导合成法
②置换合成法
③PCR合成法
④快速扩增cDNA末端法
⑤双链cDNA末端的处理
⑥cDNA与载体的连接

84、问答题  什么是Western印迹？它与Southern印迹有什么不同？

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本题答案：Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到
本题解析：试题答案Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体（蛋白质）。

85、问答题  当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施？为什么？

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本题答案：注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶。这样可
本题解析：试题答案注意星活性，先低盐，后高盐；先低温酶，后高温酶。这样可以直接在换酶前使第一种酶失活，再加第二种酶，否则易产生星活性。或使用通用缓冲液除去。

86、单项选择题  基因工程操作常用的酶是：（I内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶）（）

A.I+II
B.I+III+IV
C.II+III+IV
D.I+II+IV+III

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

87、单项选择题  启动子的特征之一是（）

A、GC富积区
B、TATABox
C、转录起始位点
D、长度平均1kb
E、含有某些稀有碱基

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

88、单项选择题  用SDS-酚来抽提DNA时，SDS的浓度是十分重要的，当SDS的浓度为0.1%时（）

A.只能将DNA抽提到水相
B.只能将RNA抽提到水相
C.可将DNA、RNA一起抽提到水相
D.DNA和RNA都不能进入水相

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

89、多项选择题  下列关于限制酶的叙述正确的是（）

A.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。
B.限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。
C.如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。
D.已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。
E.能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。

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本题答案：B, C, D
本题解析：暂无解析

90、填空题  限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（）DNA。

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本题答案：单、双
本题解析：试题答案单、双

91、问答题  解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。

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本题答案：质粒是细菌拟核裸露DNA外的遗传物质。
质粒
本题解析：试题答案质粒是细菌拟核裸露DNA外的遗传物质。
质粒：
（1）具有较小的分子量。经验表明，为了避免在DNA的纯化过程中发生链的断裂，克隆载体的分子大小最好不要超过10Kb。pBR322质粒这种小分子量的特点，不仅易于自身DNA的纯化，而且可容纳较大的外源DNA片段；
（2）具有两种抗菌素抗性基因可供作转化子的选择记号，能指示载体或重组DNA分子是否进入宿主细胞以及外源DNA分子是否插入载体分子形成了重组子。

92、名词解释  同裂酶（同切点酶）

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本题答案：有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为
本题解析：试题答案有一些来源不同的限制酶识别的是同样的核苷酸靶序列，这类酶称为同裂酶。

93、问答题  重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。

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本题答案：从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如
本题解析：试题答案从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如下几个类型：
（1）基于载体遗传标记检测法
在构建基因工程载体系统时，载体DNA分子上通常携带了一定的选择性遗传标记基因，转化或转染宿主细胞后可以使后者呈现出特殊的表型或遗传学特性，据此可进行转化子或重组子的初步筛选。
（2）基于克隆DNA序列检测法
Southern印迹杂交：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与已标记的单链DNA探针的杂交作用以检测这些被转移的DNA片段。
（3）基于外源基因产物检测法
如果目的基因产物能降解某些药物使菌株呈现出抗性标记，或者基因产物与某些药物作用是显颜色反应，则可根据抗性或颜色直接筛选含目的基因的克隆子。

94、单项选择题  若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入（）

A、半乳糖
B、葡萄糖
C、蔗糖
D、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）
E、异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

95、名词解释  基因芯片（gene chip）

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本题答案：又称DNA芯片，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段
本题解析：试题答案又称DNA芯片，是指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段有规律地排列固定于支持物上，样品DNA/RNA通过PCR扩增、体外转录等技术掺入荧光标记分子，然后按碱基配对原理进行杂交，再通过荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号作出比较和检测，从而迅速得出所要的信息。

96、问答题  怎样将一个平末端DNA片段插入到Eco RI限制位点中去？

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本题答案：化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的
本题解析：试题答案化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生Eco RI的单链末端。这种片段就可以插入到任何Eco RI的限制性内切酶位点中。

97、问答题  什么是斑点杂交（DotHybridization）与狭缝杂交（SlotHybridization）？

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本题答案：将DNA或RNA样品直接点在固体支持物上，然后与核酸探
本题解析：试题答案将DNA或RNA样品直接点在固体支持物上，然后与核酸探针进行分子杂交，这种方法称为斑点杂交。如果借用一种模具，将核酸样品加到模具的狭缝中，通过真空抽滤印迹到滤膜上，然后进行杂交称为狭缝印迹杂交。

98、名词解释  星号活性

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本题答案：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测
本题解析：试题答案限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。）克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA样品的重新处理等。

99、问答题  简述Sanger双脱氧链终止法的基本原理。（聚丙烯酰胺凝胶电泳模式图）

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本题答案：（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5&rsquo
本题解析：试题答案（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端到3’端聚合（DNA聚合酶参与了细菌修复DNA合成过程。）；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’-OH末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段，通过比较所以的DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

100、名词解释  S-D Sequence:S-D序列

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本题答案：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始
本题解析：试题答案在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称S-D序列。

101、问答题  DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。

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本题答案：在碱性环境下，核酸分子带负电荷，在外加电场的作用下，分
本题解析：试题答案在碱性环境下，核酸分子带负电荷，在外加电场的作用下，分子在凝胶多孔性刚性滤孔中从负极向正极泳动，其中主要由于分子筛效应和电荷效应达到分离不同大小核酸分子的目的。

102、问答题  列举质粒载体必须具备的4个基本特性。

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本题答案：（1）独立复制；
（2）有选择标记；
本题解析：试题答案（1）独立复制；
（2）有选择标记；
（3）有独特的酶切位点；
（4）能转化但不扩散。

103、单项选择题  限制性内切核酸酶的星活性是指（）

A.在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。
B.活性大大提高
C.切割速度大大加快
D.识别序列与原来的完全不同

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

104、单项选择题  从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是（）

A.抑制核酸酶的活性
B.保护DNA，防止断裂
C.加速蛋白质变性
D.有利于细胞破碎

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

105、名词解释  Southern blotting:Southern印迹

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本题答案：Southern发明的一种影印转移物质的方法。
本题解析：试题答案Southern发明的一种影印转移物质的方法。

106、名词解释  重组子

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本题答案：含有重组DNA分子的转化子
本题解析：试题答案含有重组DNA分子的转化子

107、问答题  启动子从转录模式上可分为哪两种？表达系统常选用哪一种？其机理是什么？

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本题答案：启动子从转录模式上分为：组成型启动子和诱导型启动子本题解析：试题答案启动子从转录模式上分为：组成型启动子和诱导型启动子
表达系统常选用诱导型启动子
机理：指在某些特定的物理或化学信号的刺激下，该种类型的启动子可以大幅度地提高基因的转录水平。

108、问答题  大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？

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本题答案：优点：大肠杆菌培养方
本题解析：试题答案优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。

109、单项选择题  第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是（）

A.EcoRI
B.EcoB
C.EcoC
D.EcoRⅡ

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

110、问答题  琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理是什么？

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本题答案：琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种
本题解析：试题答案琼脂糖是从琼脂中提取的一种多糖，具亲水性，但不带电荷，是一种很好的电泳支持物。
DNA分子在琼脂糖凝胶中时有电荷效应和分子筛效应。
DNA分子在高于等电点的溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应。
具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。
相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子泳动速度不一样。

111、单项选择题  关于感受态细胞的下列说法不正确的是（）

A.有人工感受态细胞和自然感受态细胞。
B.具有可诱导性。
C.有可转移性。
D.不同种细菌出现感受态的生理时期不同。
E.不同种细菌出现感受态的比例不同。

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

112、问答题  常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？

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本题答案：外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重
本题解析：试题答案外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。

113、单项选择题  生物工程的下游技术是（）

A.基因工程及分离工程
B.蛋白质工程及发酵工程
C.基因工程及蛋白质工程
D.分离工程及蛋白质工程

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

114、单项选择题  不属于质粒被选为基因运载体的理由是（）

A、能复制
B、有多个限制酶切点
C、具有标记基因
D、它是环状DNA

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

115、问答题  可采用哪些方法进行目的片段与载体的连接？

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本题答案：（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，
本题解析：试题答案（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，产生匹配的粘性末端，可直接进行连接。
（2）目的片段与载体经限制性内切酶切割后，产生平末端，也可直接进行连接。但是由于平末端连接效率较低，可采用下面的方法进行连接。
（3）同聚物加尾法：利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA（dG）和dT（dC.，然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。
（4）接头连接法：将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA分子加到载体或外源DNA的分子上，在这一小段DNA分子上有某种限制性内切核酸酶的识别序列，这样便在载体DNA和外源DNA上制造出新的酶切点，产生匹配的黏末端以便于连接。这一小段含有酶切点的DNA分子称为连接器分子。
（5）PCR接头法：设计含有限制酶切位点的引物，在PCR过程中在目的片段直接加上接头

116、单项选择题  基因工程操作的三大基本元件是：（I供体II受体III载体IV抗体V配体）（）

A.I+II+III
B.I+III+IV
C.II+III+IV
D.II+IV+V

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

117、单项选择题  在回收DNA片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA的照射损伤应使用（）

A.长波长紫外
B.短波长紫外
C.长波长红外
D.短波长红外
E.ABCD都不可

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

118、多项选择题  下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（）

A.高纯度DNA。
B.载体与目的基因摩尔数之比为1：1。
C.载体与目的基因摩尔数之比为1：3~5。
D.连接反应体系中DNA浓度较高。
E.连接反应体系中DNA浓度较低。

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本题答案：A, C, D
本题解析：暂无解析

119、问答题  基因工程操作的基本步骤是什么？

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本题答案：①施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（
本题解析：试题答案①施工材料的准备，即目的基因、载体、工具酶和受体细胞（宿主）的准备。用限制性内切酶分别将外源DNA和载体分子切开。（切）
②目的基因与载体DNA的体外重组，形成重组DNA分子。（接）
③把重组的DNA分子引入受体细胞，并建立起无性繁殖系。（转和扩）
④筛选出所需要的无性繁殖系，并保证外源基因在受体细胞中稳定遗传、正确表达。（检）

120、单项选择题  有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（）

A.TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性
B.便于排除错误碱基的掺入
C.易于退火
D.易于重组连接

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

121、问答题  YAC载体具有什么样的功能性DNA序列？为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性？

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本题答案：YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一
本题解析：试题答案YAC带有天然染色体所有的功能元件，包括一个着丝粒，一个DNA复制起点，两个端粒。YAC能够容纳长达几百kb的外源DNA，这是质粒和黏粒办不到的。大片段的插入更有可能包含完整的基因，在染色体步移中每次允许更大的步移距离，同时能够减少完整基因组文库所需的克隆数目。

122、多项选择题  酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（）

A.储存温度不合适
B.稀释后储存
C.储存缓冲液不合适
D.分装后储存
E.储存缓冲液中蛋白浓度低

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本题答案：A, B, C, E
本题解析：暂无解析

123、多项选择题  关于II类限制酶说法正确的是（）

A.具内切核酸酶和甲基化酶活性
B.仅有内切核酸酶活性
C.只识别非甲基化的DNA序列
D.II类限制酶反应条件只需要Mg2+
E.II类限制酶反应需要Mg2+，ATP

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本题答案：B, D
本题解析：暂无解析

124、填空题  限制性内切酶通常保存在（）浓度的甘油溶液中。

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本题答案：50%
本题解析：试题答案50%

125、问答题  影响核酸保存的关键因素是什么？怎样保存核酸制品？

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本题答案：关键因素：
①保存液的酸碱度
②保
本题解析：试题答案关键因素：
①保存液的酸碱度
②保存温度
保存方法：
①一般保存可用浓盐液，NaCL-柠檬酸缓冲液或0.1mol/L醋酸缓冲液。
②对DNA来说，在pH4～11的范围分子的碱基较稳定，超出此范围DNA易变性或降解，低温、稀碱下保存DNA及低温下保存RNA均较稳定。
③固态核酸通常在0℃以上低温干燥保存即可。

126、问答题  什么是SD序列？

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本题答案：原核生物起始密码子AUG上游7~12个核苷酸的保守区，
本题解析：试题答案原核生物起始密码子AUG上游7~12个核苷酸的保守区，能与16srRNA的3’端反向互补

127、问答题  什么叫染色体步查？其用途如何？

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本题答案：染色体步查：采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA
本题解析：试题答案染色体步查：采用一段分离自某一重组体一端的非重复DNA片段作为探针以鉴定含有相邻序列的重组克隆。重复这一过程，直到得到整个目的基因区。用途：主要用于基因定位克隆，尤其是克隆与分析组成某一基因家族的真核DNA区段。

128、问答题  常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？

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本题答案：限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；DNA
本题解析：试题答案限制性核酸内切酶：识别并特异切割DNA碱基序列；DNApol1：催化缺口平移，制备高比度DNA探针；Klenow片段：合成cDNA第二条链，补齐或标记DNA3’端；逆转录酶：催化合成cDNA；DNA连接酶：催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键；末端脱氧核苷酸转移酶：给载体或cDNA加上互补的同聚尾、加标记物；碱性磷酸酶：防止载体自身连接、32p标记5’端.

129、名词解释  cDNA文库

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本题答案：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载
本题解析：试题答案是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。

130、单项选择题  线性质粒复制的引物来自于（）

A.细胞中合成的小分子RNA
B.自身末端的端粒序列
C.外加的寡聚DNA
D.自身断裂的小分子DNA

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

131、问答题  什么是α-互补筛选？

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本题答案：质粒载体具有β-半乳糖苷酶基因（lacZ），
本题解析：试题答案质粒载体具有β-半乳糖苷酶基因（lacZ），当外源DNA插入到它的lacZ，可造成表达后的β-半乳糖苷酶失活，利用这一点就可以通过大肠杆菌转化子菌落在添加有X-gal-IPTG培养基中的颜色变化鉴别出重组子和非重组子。有些大肠杆菌上带有lacZ基因的部分编码序列，质粒载体中含有别一部分编码序列，当质粒转入载体后，可形成具有酶活性的蛋白质。这种lacZ基因上缺失了一部分编码序列的突变体与带有这一部分编码序列的突变体之间实现互补的现象叫α互补。

132、问答题  在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA而不用基因组DNA？为什么要在cDNA前加上细菌的启动子？

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本题答案：这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的
本题解析：试题答案这是因为细菌没有内含子剪接系统，并且不能识别真核生物的启动子的原因。

133、单项选择题  限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（）

A.识别和切割序列发生变化。
B.切割活性大大提高。
C.识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E.只能部分切割DNA。

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本题答案：A
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134、问答题  什么是扣除杂交？其基本原理是什么？

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本题答案：概念：将含目标基因的组织或器官的mRNA群体作为待测样
本题解析：试题答案概念：将含目标基因的组织或器官的mRNA群体作为待测样本（Tester），将基因表达谱相似或相近但不含目标基因的组织或器官的mRNA群体作为对照样本（Driver），将Tester和Driver的cDNA进行多次杂交，去掉在二者之间都表达的基因，而保留二者之间差异表达的基因。
原理：一种细胞的总mRNA反转录制备的cDNA与另一细胞的总mRNA混合形成cDNA-RNA杂交分子通过羟基磷灰石柱被扣除，未杂交的单链cDNA流出柱子外，其对应的低丰度mRNA得以克隆。

135、问答题  以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体？

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本题答案：改造的置换型噬菌体载体，重组人外源片段之后，总体积不能
本题解析：试题答案改造的置换型噬菌体载体，重组人外源片段之后，总体积不能超过λ基因组的105％，不能少于λ基因组的75％。以置换型λ噬菌体DNA作为载体，首先要分离左、右两臂同外源DNA重组。如果没有外源片段，仅是两臂连接，长度短于λ基因组的75％，不能被包入噬菌体颗粒，就不能感染寄主，也就不能形成噬菌斑。如果插入了外源片段后，总长度超过丸基因组105％后，也不能包入噬菌体颗粒，自然不能形成噬菌斑。

136、单项选择题  用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）

A.染色体DNA断成了碎片
B.染色体DNA分子量大，而不能释放
C.染色体变性后来不及复性
D.染色体未同蛋白质分开而沉淀

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

137、单项选择题  某一重组D、NA、（6.2kB）的载体部分有两个SmA、I酶切位点。用SmA、I酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmA、I酶切位点共有（）

A、4个
B、3个
C、2个
D、至少2个

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

138、多项选择题  通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（）

A.限制酶只切割两个变异等位基因中的一个
B.限制酶位点可作为遗传标记
C.它不依赖变异的等位基因的产物的功能
D.不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异
E.同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同

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本题答案：B, C
本题解析：暂无解析

139、问答题  什么是蓝白斑筛选法？

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本题答案：这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体
本题解析：试题答案这种方法是根据组织化学的原理来筛选重组体。主要是在载体的非必要区插入一个带有大肠杆菌—半乳糖苷酶的基因片段，携带有lac基因片段的载体转入lac的宿主菌后，在含有 5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷（X-gal）平板上形成浅蓝色的噬菌斑。外源基因插人lac（或lac基因部分被取代）后，重组的噬菌体将丧失分解X-gal的能力，转入lac-宿主菌后，在含有5—溴—4—氯—3—引哚——D—半乳糖苷（X-gal）平板上形成白色的噬菌斑，非重组的噬菌体则为蓝色噬菌斑。

140、单项选择题  基因工程菌中重组质粒的丢失机制是（）

A、重组质粒渗透至细胞外
B、重组质粒被细胞内核酸酶降解
C、重组质粒在细胞分裂时不均匀分配
D、重组质粒杀死受体细胞
E、重组质粒刺激受体细胞提高其通透性

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

141、多项选择题  有关PCR的描述下列哪项正确（）

A.polymerase chainre action的字首缩写
B.1993年获诺贝尔化学奖
C.已广泛的应用于医学各学科
D.能够准确对扩增模板定量
E.以上都对

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本题答案：A, B, C
本题解析：暂无解析

142、单项选择题  DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能？（）

A.酶失活
B.蛋白质（如BSA.同DNA结合
C.酶切条件不合适
D.有外切核酸酶污染

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

143、单项选择题  用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（）

A.核酸内切酶
B.核苷酸激酶
C.核酸外切酶
D.末端转移酶
E.碱性磷酸酶

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

144、问答题  大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？

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本题答案：优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学
本题解析：试题答案优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。

145、填空题  甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在（）以下。

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本题答案：5%
本题解析：试题答案5%

146、多项选择题  下列哪些补体调节因子具有使机体正常组织细胞免受补体介导的损伤作用的功能()

A．B因子
B．MCP
C．CR1
D．C8bp
E．CD59

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本题答案：B, C, D, E
本题解析：暂无解析

147、问答题  什么是包涵体？

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本题答案：重组蛋白在胞内表达时，常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形
本题解析：试题答案重组蛋白在胞内表达时，常常以不溶性蛋白聚集成的晶状物形式存在，这种晶状体即包涵体。包涵体的形成是外源蛋白的高效表达时的普遍现象，这是由于肽链折叠过程中部分折叠的中间态发生了错误聚合，而不是形成成熟的天然态或完全解链的蛋白。

148、问答题  出现转基因沉默现象的可能原因分析。

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本题答案：（1）位置效应：指插入部位及其周围序列对外源基因的影响
本题解析：试题答案（1）位置效应：指插入部位及其周围序列对外源基因的影响
（2）DNA甲基化：包括编码序列和启动子的甲基化
（3）重复序列诱发基因沉默：多拷贝串联重复序列易引起外源基因的失活；
（4）共抑制（co-suppression）：具有部分同源性的外源基因和植物内源基因相互作用引起的沉默现象。

149、填空题  为提高重组转化效果，对同一种酶切后载体进行（）处理。

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本题答案：脱磷
本题解析：试题答案脱磷

150、单项选择题  第一个作为重组DNA载体的质粒是（）

A.pBR322
B.ColEl
C.pSCl01
D.pUCl8

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

151、单项选择题  下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是（） I限制性酶切；IIPCR扩增；III抗药性筛选

A、I
B、I+II
C、I+III
D、II+III
E、I+II+III

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

152、单项选择题  BamHI、XbaI、BglII的识别位点分别是：G↓GATCC、T↓CTAGA、A↓GATCT，哪些酶切结果可产生互补的末端？（）

A.以上几种酶切结果产生的末端都可互补
B.产生的末端都不能互补
C.仅BamHI与BglII的酶切末端互补
D.仅BamHI与XbaI的酶切末端互补
E.仅XbaI与BglII的酶切末端互补

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

153、填空题  在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为（）性克隆。

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本题答案：阴
本题解析：试题答案阴

154、单项选择题  克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因）（）

A.I+II
B.I+III
C.II+III
D.I+II+III

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

155、问答题  说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。

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本题答案：限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株
本题解析：试题答案限制性内切核酸酶采用三字母的命名原则，即属名+种名+株名的各一个首字母，再加上序号.基本原则：3-4个字母组成，方式是：属名+种名+株名+序号；首字母：取属名的第一个字母，且斜体大写；第二字母：取种名的第一个字母，斜体小写；第三字母：
（1）取种名的第二个字母，斜体小写；
（2）若种名有词头，且已命名过限制酶，则取词头后的第一字母代替.第四字母：若有株名，株名则作为第四字母，是否大小写，根据原来的情况而定，但用正体.顺序号：若在同一菌株中分离了几种限制酶，则按先后顺序冠以I，Ⅱ，Ⅲ，…等，用正体.

156、名词解释  同尾酶

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本题答案：某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端
本题解析：试题答案某些限制性内切酶识别的碱基顺序不同，但酶切后产生同样粘性末端的两种酶

157、填空题  在抽提DNA中，酚的作用是（），氯仿的作用是增加比重，有助于分相。

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本题答案：去除蛋白
本题解析：试题答案去除蛋白

158、问答题  何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识DNA序列的结构特点。

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本题答案：限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异性核苷
本题解析：试题答案限制性核酸内切酶是一类能识别双链DNA分子中特异性核苷酸序列并由此特异切割DNA双链结构的水解酶.是在DNA分子内部切割，水解磷酸二酯键的核酸内切酶。能够识别特异的DNA碱基序列，DNA碱基序列往往呈回文对称结构；并具有特异切割位点。

159、单项选择题  粘末端连接的优点是操作简便且（）

A.可产生新的酶切位点
B.载体易自身环化
C.易于回收片段
D.具有方向性
E.选时更简便

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

160、问答题  简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。

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本题答案：同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末
本题解析：试题答案同尾酶：来源 不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶
（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。）

161、单项选择题  RFLP形成的原因是（）

A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。
B.使用不同的限制性内切酶进行切割。
C.杂交时使用不同的探针。
D.每种染色体存在两条。
E.提取不同的染色体DNA酶切。

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

162、名词解释  质粒不亲和性

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本题答案：在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中
本题解析：试题答案在没有选择压力的情况下，两种不同质粒不能够在同一宿主细胞系中稳定地共存的现象。

163、填空题  当目的片段无限长时，使用识别碱基数为4和6的限制性内切酶进行切割时，理论上产生的片段数之比是（）。

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本题答案：16：1
本题解析：试题答案16：1

164、单项选择题  用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。

A.Southem印迹杂交
B.Northem印迹杂交
C.Western印迹
D.原位菌落杂交

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

165、问答题  常用的目的基因的获取方法有哪些？

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本题答案：制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增目的基因、
本题解析：试题答案制备基因组文库、构建cDNA文库、PCR扩增目的基因、人工合成DNA技术

166、单项选择题  PCR反应产物的特异性取决于（）

A.镁离子浓度
B.退火温度
C.引物碱基组成和长度
D.循环次数
E.A+B+C

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

167、单项选择题  黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）

A.产生新切点 
B.易于回收外源片段 
C.载体不易环化 
D.影响外源基因的表达

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

168、单项选择题  下列哪一种酶作用时需要引物？（）

A.限制酶
B.末端转移酶
C.反转录酶
D.DNA连接酶

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

169、多项选择题  下列因素中影响限制酶切割的有（）

A.EDTA浓度
B.甘油浓度
C.DNA纯度
D.酶的自身活性
E.盐浓度

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

170、单项选择题  CDNA、法获得目的基因的优点是（）

A、成功率高
B、不含内含子
C、操作简便
D、表达产物可以分泌

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本题答案：A
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171、问答题  什么是复制子？

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本题答案：复制子是能够进行独立复制的一种遗传因子。每一个复制子都
本题解析：试题答案复制子是能够进行独立复制的一种遗传因子。每一个复制子都含有一个与特定的RNA聚合酶结合的序列和DNA复制起始部位，即开始复制的复制区。另外，复制子也包括一个复制的终止区。一个染色体可以是一个复制子（例如细菌的染色体），也可以含有多个复制子（如真核生物的染色体）。一个失去了复制起点的DNA不能独立进行复制，但是，当它和另一个复制子连接起来时，就能在后者的带动下进行复制。

172、问答题  试述基因工程技术的发展方向？

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本题答案：生物的遗传改良，生物反应器、基因治疗和基因疫苗等。本题解析：试题答案生物的遗传改良，生物反应器、基因治疗和基因疫苗等。

173、名词解释  限制性片段长度多态性（RFLP）

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本题答案：当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当
本题解析：试题答案当DNA序列的差异发生在限制性内切酶的识别位点时，或当DNA片段的插入、缺失或重复导致基因组DNA经限制性内切酶酶解后，其片段长度的改变可以经过凝胶电泳区分，出现的这种DNA多态性称为限制性片段长度多态性。

174、多项选择题  DNA片段重组连接可用下列哪些方法（）

A.平末端连接
B.粘末端连接
C.加接头连接
D.同聚尾连接
E.T载体连接

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

175、单项选择题  在翻译过程中．mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是（）

A、启动子
B、调节基因
C、SD序列
D、终止子

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

176、单项选择题  在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（）

A.I类限制酶
B.II类限制酶
C.III类限制酶
D.核酸内切酶
E.RNAase

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

177、问答题  什么是基因组文库（genomiclibrary）？它同遗传学上的基因库有什么不同？

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本题答案：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基
本题解析：试题答案基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。包括下列过程：高分子质量染色体DNA的制备；体外重组连接；将重组DNA导入寄主细胞并扩增；筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库（genepoo1）是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。

178、问答题  用酚/氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚/氯仿中加入少许异戊醇，原因是什么？

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本题答案：异戊醇是一种有机试剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产
本题解析：试题答案异戊醇是一种有机试剂，可以降低表面张力，从而减少气泡产生。另外，异戊醇有助于分相使离心后的上层含DNA的水相，中间的性变蛋白质相及下层有机溶剂相维持稳定。

179、单项选择题  在DNA分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（）

A.控制反应温度
B.控制酶的反应时间
C.控制DNA聚合酶的用量
D.控制反应PH
E.限制dNTP的种类

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

180、问答题  影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？

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本题答案：（1）DNA的纯度
（2）DNA甲基化的程度
本题解析：试题答案（1）DNA的纯度
（2）DNA甲基化的程度
（3）酶切消化反应的温度
（4）DNA的分子结构
（5）核酸内切限制酶的缓冲液

181、名词解释  转化子（transformant）

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本题答案：通过转化方式而形成的杂种后代。
本题解析：试题答案通过转化方式而形成的杂种后代。

182、问答题  PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？

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本题答案：（1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、
本题解析：试题答案（1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。

183、单项选择题  II类限制酶反应中必须的阳离子是（）

A.Na+
B.Ca2+
C.Mg2+
D.Zn2+
E.Mn2+

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

184、问答题  原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？

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本题答案：1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平
本题解析：试题答案1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控
原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。
2）真核生物基因表达的特点：
1．基因组DNA存在的形式与原核生物不同；
2．真核生物中转录和翻译分开进行；
3．基因表达具有细胞特异性或组织特异性；
4．真核基因表达的调控在多个水平上进行：DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控；

185、填空题  DNA分子标记的方法有（）；（）、末端标记法、交换反应标记法四种。

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本题答案：缺口平移法、随机引物法
本题解析：试题答案缺口平移法、随机引物法

186、问答题  引起核酸变性的因素主要有哪些？核酸变性后性质有何变化？

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本题答案：引起核酸变性的因素：--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。<
本题解析：试题答案引起核酸变性的因素：--温度、酸、碱、甲醛和尿素等。
DNA变性后，它的一系列性质发生变化，如紫外吸收（260nm）值升高（增色效应），粘度降低等，如DNA增加25－40%.RNA约增加1.1%。

187、问答题  如何有效地提高外源基因的表达效率？

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本题答案：⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距
本题解析：试题答案⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距离
⑶高效的翻译起始序列
⑷高效的转录终止区
⑸提高质粒拷贝数及稳定性
⑹用以下方法提高翻译水平：
①调整SD序列与AUG间的距离
②用点突变的方法改变某些碱基
③增加mRNA的稳定性的
⑺减轻细胞的代谢负荷：
①诱导表达
②表达载体的诱导复制
⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：
①克隆一段原核序列，表达融合蛋白
②采用某种突变菌株
③表达分泌蛋白质

188、名词解释  穿梭质粒载体

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本题答案：指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两
本题解析：试题答案指一类由人工构建的具有两种不同复制起点的选择标记，因而可在两种不同宿主细胞中存活和复制的质粒载体。

189、单项选择题  根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成（）

A、2大类
B、3大类
C、4大类
D、5大类

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

190、单项选择题  基因工程的单元操作顺序是（）

A、增，转，检，切，接
B、切，接，转，增，检
C、接，转，增，检，切
D、检，切，接，增，转
E、切，接，增，转，检

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

191、问答题  碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。

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本题答案：碱裂解法原理：在碱性条件下，双连DNA氢键断裂，结构破
本题解析：试题答案碱裂解法原理：在碱性条件下，双连DNA氢键断裂，结构破坏变性，环状超螺旋质粒不充分变性。在中性条件下变性质粒恢复原来构型，而线性大分子细菌DNA不能复性呈不溶物而经离心除去。
（各种可能因素是上一届的，具体其实大家可以根据那天师兄说的去写）
提取失败：
1）洗去双链时，将质粒DNA洗去；
2）破壁失败，质粒没析出；
3）加剂问题
电泳失败：1）电压太高
2）没加染色剂
3）胶穿孔
4）电泳时间过长

192、问答题  什么是限制性核酸内切酶？第二型限制酶有何特点？

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本题答案：限制性核酸内切酶（限制酶，restriction en
本题解析：试题答案限制性核酸内切酶（限制酶，restriction endonuclease）是一类能够识别双链DNA分子中的某些特定核苷酸序列，并对DNA分子进行切割的核酸内切酶。
第二型限制酶特点：2亚基，单辅因子；识别序列是由4、5、6或7个核苷酸组成的特定核苷酸序列，识别位点双重旋转对称结构，切割与识别位点相同或相近。分子量较小，仅需Mg2+作为催化反应的辅助因子，不需ATP。

193、问答题  电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因，有何解决办法？

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本题答案：原因：电泳缓冲液的离子的富集作用；
解决方法
本题解析：试题答案原因：电泳缓冲液的离子的富集作用；
解决方法：
1.更换成新配置的电泳缓冲液；
2.把电泳槽中的缓冲液倒出混匀后再重新使用

194、问答题  何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？

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本题答案：将外源DNA或基因携带入宿主细胞（hostcell）的
本题解析：试题答案将外源DNA或基因携带入宿主细胞（hostcell）的工具称为载体载体具备的特点：
①在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）
②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；
③有一定的选择标记，用于筛选；
④最好具有较高的拷贝数，便于制备。

195、问答题  试述载体构建一般方法

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本题答案：A目的基因分析
（1）ORF分析

本题解析：试题答案A目的基因分析
（1）ORF分析
（2）酶切位点分析
B载体选择与分析
（1）多克隆位点分析
（2）抗性标记分析
（3）启动子与其他筛选标记分析
C连接体系与连接时间确定

196、问答题  酚与氯仿联合使用的好处？

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本题答案：原因是酚和水有一定程度的互溶，所以单独使用酚抽提DNA
本题解析：试题答案原因是酚和水有一定程度的互溶，所以单独使用酚抽提DNA，最终不能除去酚，残留的酚会使起切割和连接作用的限制性内切核酸酶和连接酶变性。氯仿也是蛋白质变性剂，它不与水互溶，但是能够同苯酚互溶。这样，酚和氯仿联合使用，就可以带走残留的酚

197、问答题  什么是基因组文库（genomiclibrary）？构建基因组文库，涉及哪些基本过程？它同遗传学上的基因库有什么不同？

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本题答案：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基
本题解析：试题答案基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。一般以改造的噬菌体DNA或黏粒作为载体，包括下列过程：
（1）高分子量染色体DNA的制备；
（2）体外重组连接；
（3）包装蛋白的制备；
（4）重组体的体外包装；
（5）将重组DNA导人寄主细胞；
（6）筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库（genepool）是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。

198、名词解释  MCS

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本题答案：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶
本题解析：试题答案指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。

199、单项选择题  构建基因文库一般使用的载体是（） I质粒；IIλ-DNA；IIICosmid

A、I
B、II
C、III
D、II+III
E、I+II+III

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本题答案：E
本题解析：暂无解析

200、问答题  在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变为平端的方法有哪些？

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本题答案：（1）5’—突出黏性末端的补平
本题解析：试题答案（1）5’—突出黏性末端的补平，一般选用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow大片段聚合酶进行填补；
（2）3’—突出黏性末端的切平，一般选用T4噬菌体DNA聚合酶或单链DNA的SI核酸切平。