1、名词解释 限制性片段长度多态性（RFLP）
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2、问答题 用酚/氯仿抽提DNA时，通常要在氯仿或酚/氯仿中加入少许异戊醇，原因是什么？
3、单项选择题 TaqDNA聚合酶的发现使得PCR技术的广泛运用成为可能，这是因为（）
A、TaqDNA聚合酶能有效地变性基因扩增产物 B、TaqDNA聚合酶催化的聚和反应不需要引物 C、TaqDNA聚合酶具有极强的聚和活性 D、TaqDNA聚合酶能使多轮扩增反应连续化 E、TaqDNA聚合酶能使扩增反应在DNA变性条件下进行
4、单项选择题 有关PCR的描述下列哪项不正确（）
A.是一种酶促反应 B.引物决定了扩增的特异性 C.扩增的产量按Y=m（1+X）n D.扩增的对象是氨基酸序列 E.扩增的对象是DNA序列
5、问答题 电泳缓冲液使用一定时间后出现DNA在凝胶中跑不动现象的原因，有何解决办法？
6、问答题 什么是质粒的相容性？什么是不相容群？机制是什么？
7、单项选择题 限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（）
A.识别和切割序列发生变化。 B.切割活性大大提高。 C.识别和切割序列与原来完全不同。 D.可以任意切割DNA。 E.只能部分切割DNA。
8、问答题 试述载体构建一般方法
9、问答题 外源基因导入植物的方法主要有哪些？
10、填空题 当目的片段无限长时，使用识别碱基数为4和6的限制性内切酶进行切割时，理论上产生的片段数之比是（）。
11、单项选择题 用DEAE膜片法回收电泳分离的DNA片段时，在紧靠目的DNA片段前方的凝胶切一裂缝，以插入DEAE纤维素膜，该裂缝长度与DNA条带相比应（）
A.略短 B.等长 C.略长 D.A或B都可 E.A、B、C都可
12、单项选择题 变色的酚中含有氧化物，这种酚不能用于DNA分离，原因主要是（）
A.氧化物可使DNA的磷酸二酯键断裂 B.氧化物同DNA形成复合物 C.氧化物会改变pH值 D.氧化物在DNA分离后不易除去
13、多项选择题 重组连接时，反应体系必须的组分有（）
A.Mg2+ B.BSA C.ATP D.PO43- E.EDTA
14、问答题 什么叫染色体步查？其用途如何？
15、名词解释 S-D Sequence:S-D序列
16、单项选择题 下列三种方法中，能有效区分重组子与非重组子的是（） I限制性酶切；IIPCR扩增；III抗药性筛选
A、I B、I+II C、I+III D、II+III E、I+II+III
17、单项选择题 下列关于限制酶反应的说法错误的是（）
A.限制酶识别序列内或其邻近的胞嘧啶、腺嘌呤或尿嘧啶被甲基化后，可能会阻碍限制酶的酶解活性。 B.许多限制酶对线性DNA和超螺旋DNA底物的切割活性是有明显差异的。 C.有些限制酶对同一DNA底物上不同酶切位点的切割速率会有差异。 D.限制酶反应缓冲系统一般不用磷酸缓冲液，是由于磷酸根会抑制限制酶反应。 E.BSA对许多限制酶的切割活性都有促进作用，所以酶切反应中常加入一定量的BSA。
18、单项选择题 用SDS-酚来抽提DNA时，SDS的浓度是十分重要的，当SDS的浓度为0.1%时（）
A.只能将DNA抽提到水相 B.只能将RNA抽提到水相 C.可将DNA、RNA一起抽提到水相 D.DNA和RNA都不能进入水相
19、问答题 什么是基因组文库（genomiclibrary）？构建基因组文库，涉及哪些基本过程？它同遗传学上的基因库有什么不同？
20、单项选择题 基因工程是在DNA分子水平上进行设计施工的。在基因操作的基本步骤中，不进行碱基互补配对的是()
A.人工合成目的基因 B.目的基因与运载体结合 C.将目的基因导入受体细胞 D.目的基因的检测表达
21、问答题 DNA凝胶电泳中核酸分子分离的机理。
22、单项选择题 II类限制酶反应中必须的阳离子是（）
A.Na+ B.Ca2+ C.Mg2+ D.Zn2+ E.Mn2+
23、单项选择题 DNA回收时，如要除去EB（溴化乙锭）可用下列那种试剂（）
A.正丁醇 B.苯酚 C.氯仿 D.异戊醇 E.乙醇
24、问答题 说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。
25、问答题 在基因工程中，为了在细菌细胞中表达真核生物的基因产物，为什么通常要用cDNA而不用基因组DNA？为什么要在cDNA前加上细菌的启动子？
26、问答题 什么是星活性，产生星活性的因素可能有哪些？
27、单项选择题 识别10碱基序列的限制酶，大约每隔（）进行一次切割。
A.4l0 B.104 C.2l0 D.102 E.24
28、填空题 在抽提DNA中，酚的作用是（），氯仿的作用是增加比重，有助于分相。
29、单项选择题 下列各常用载体的装载量排列顺序，正确的是（）
A、Cosmid>λ-DNA>Plasmid B、λ-DNA>Cosmid>Plasmid C、Plasmid>λ-DNA>Cosmid D、Cosmid>Plasmid>λ-DNA E、λ-DNA>Plasmid>Cosmid
30、单项选择题 强化基因转录的元件是（）
A、密码子 B、复制子 C、启动子 D、内含子 E、外显子
31、多项选择题 如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（）
A.限制酶失活 B.限制酶的星号活性 C.有其他限制酶污染 D.有抑制剂存在 E.测试DNA中有其他DNA污染
32、单项选择题 关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。
A.由作用于同一DNA序列的两种酶构成 B.这一系统中的核酸酶都是II类限制性内切核酸酶 C.这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰 D.不同的宿主系统具有不同的限制--修饰系统
33、填空题 限制与修饰是宿主的一种保护体系，它是通过对外源（）的限制和对自身DNA的修饰来实现的。
34、问答题 简述λ噬菌体载体的克隆原理及一般步骤？
35、名词解释 Southern blotting:Southern印迹
36、填空题 在制备感受态细胞时，为了提高转化率，常用冰冻的（）处理和短暂的42℃热击处理。
37、问答题 琼脂糖凝胶电泳分离DNA的原理是什么？
38、问答题 切口移位（nick translation）标记探针的主要步骤有哪些？
39、问答题 什么是限制性核酸内切酶？第二型限制酶有何特点？
40、单项选择题 关于感受态细胞的下列说法不正确的是（）
A.有人工感受态细胞和自然感受态细胞。 B.具有可诱导性。 C.有可转移性。 D.不同种细菌出现感受态的生理时期不同。 E.不同种细菌出现感受态的比例不同。
41、名词解释 星号活性
42、多项选择题 PUC质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（）
A.AmPr B.ori复制子 C.LacZ标记 D.多克隆位点
43、单项选择题 质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（）①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”
A.①③⑤⑦ B.②④⑥ C.①③⑥⑦ D.②③⑥⑦
44、问答题 何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？
45、单项选择题 提高重组率的方法包括（I加大外源DNA与载体的分子之比II载体分子除磷III连接酶过量IV延长连接反应时间）（）
A.I+II B.I+II+III C.I+III+IV D.II+III+IV
46、单项选择题 有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（）
A.TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性 B.便于排除错误碱基的掺入 C.易于退火 D.易于重组连接
47、问答题 理想质粒载体的必备条件？
48、问答题 影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？
49、问答题 碱裂解法提取质粒DNA的原理，分析影响试验结果的各种可能因素。
50、多项选择题 在DNA重组连接时，常采用连接头连接（linker ligation），其作用是（）
A．引入某些限制酶切位点。 B.人工构建载体。 C．增加调控元件。 D.调整阅读框。 E．通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点，并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护，可保护目的基因不受限制酶破坏。
51、问答题 原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？
52、问答题 什么是α-互补筛选？
53、单项选择题 RFLP形成的原因是（）
A.由于遗传变异造成同源染色体中碱基的随机变化。 B.使用不同的限制性内切酶进行切割。 C.杂交时使用不同的探针。 D.每种染色体存在两条。 E.提取不同的染色体DNA酶切。
54、问答题 当两种限制酶反应条件不同时，若要用双酶切，应采取什么措施？为什么？
55、填空题 识别顺序相同但切割位点不同者称（）酶，识别顺序与切割方式均相同者称（）酶，来源与识别顺序均不同，但切割后形成的限制性片段有相同的粘性末端，称（）酶。
56、填空题 限制酶识别序列为（）个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。
57、问答题 简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。
58、问答题 小批量碱变性提取质粒DNA的原理与基本过程如何？
59、名词解释 穿梭质粒载体
60、问答题 说明Sanger DNA测序法的原理。
61、问答题 什么是斑点杂交（DotHybridization）与狭缝杂交（SlotHybridization）？
62、单项选择题 下列关于同裂酶的叙述错误的是（）
A.是从不同菌种分离到的不同的酶，也称异源同工酶。 B.它们的识别序列完全相同。 C.它们的切割方式可以相同，也可以不同。 D.有些同裂酶识别的完整序列不完全一样，但切割位点间的序列一样。 E.两种同裂酶的切割产物连接后，可能会丢失这两个同裂酶的识别位点。
63、填空题 在翻译过程中，mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是（），另一个是（）。
64、问答题 什么是接头连接法？
65、单项选择题 下列各组专业术语中，含义最为接近的是（）
A、终止子与终止密码子 B、基因表达与基因转译 C、D、NA、退火与D、NA、复性 D、重组子与转化子
66、单项选择题 PCR反应产物的特异性取决于（）
A.镁离子浓度 B.退火温度 C.引物碱基组成和长度 D.循环次数 E.A+B+C
67、问答题 什么是基因？根据基因的产物，基因可分为哪三类？
68、名词解释 杂交的时间
69、单项选择题 第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是（）
A.EcoRI B.EcoB C.EcoC D.EcoRⅡ
70、问答题 在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？
71、单项选择题 根据基因工程的定义，下列各名词中不能替代基因工程的是（）
A、基因诱变 B、分子克隆 C、DNA重组 D、遗传工程 E、基因无性繁殖
72、单项选择题 在翻译过程中．mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是起始密码AUG，另一个是（）
A、启动子 B、调节基因 C、SD序列 D、终止子
73、问答题 PCR技术主要应用在哪些领域？
74、单项选择题 构建基因文库一般使用的载体是（） I质粒；IIλ-DNA；IIICosmid
A、I B、II C、III D、II+III E、I+II+III
75、问答题 一般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？
76、填空题 基因工程所用的工具酶有（）；（）、连接酶、修饰酶四大酶类。
77、名词解释 southern杂交
78、问答题 合成cDNA第二链的主要策略有哪些？
79、问答题 列举质粒载体必须具备的4个基本特性。
80、单项选择题 带有多个不同种复制起始区的质粒是（）
A、穿梭质粒 B、表达质粒 C、探针质粒 D、整合质粒 E、多拷贝质粒
81、问答题 如何将一平末端的DNA片段与BamHI形成的粘末端连接？
82、多项选择题 限制酶切割后的产物连接反应效果差，可能原因是（）
A.限制酶去除不完全 B.平端连接 C.核酸外切酶污染 D.连接反应温度低于16℃ E.从限制酶消化中带来太高浓度的磷酸盐或其他盐类
83、问答题 出现转基因沉默现象的可能原因分析。
84、填空题 个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（）。
85、问答题 表达载体和基因工程一般克隆载体在元件构成上有何差别？
86、单项选择题 双脱氧末端终止法测定DNA序列是基于（）
A、DNA的聚合反应 B、DNA的连接反应 C、DNA的降解反应 D、特殊的DNA连接酶 E、聚合单体2’和5’位的脱氧
87、问答题 基因工程操作的基本步骤是什么？
88、填空题 限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（）DNA。
89、问答题 试述基因工程的主要研究内容。
90、填空题 基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系称为（）。
91、问答题 按适当的顺序，列出将一种mRNA的cDNA克隆到表达载体所用到的酶有哪些？
92、多项选择题 下列哪些因素对保证较高连接效率是有利的（）
A.高纯度DNA。 B.载体与目的基因摩尔数之比为1：1。 C.载体与目的基因摩尔数之比为1：3~5。 D.连接反应体系中DNA浓度较高。 E.连接反应体系中DNA浓度较低。
93、单项选择题 根据酶切活性对盐浓度的要求，限制性核酸内切酶可分成（）
A、2大类 B、3大类 C、4大类 D、5大类
94、问答题 黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。
95、问答题 为什么反转录酶在聚合反应中会出错？
96、问答题 为什么用同裂酶进行体外重组效率最高？
97、单项选择题 考斯质粒（cosmid）是一种（）
A.天然质粒载体 B.由λ-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体 C.具有溶原性质的载体 D.能在受体细胞内复制并包装的载体
98、问答题 什么是SD序列？
99、单项选择题 鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（）
A、原核细菌 B、酵母菌 C、丝状真菌 D、植物 E、人类
100、问答题 分析影响酶切的因素。
101、问答题 常用的目的基因的获取方法有哪些？
102、单项选择题 识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（）
A.同工酶 B.同尾酶 C.同裂酶 D.同位酶
103、名词解释 MCS
104、问答题 Northern印迹与Southern印迹有什么不同？
105、问答题 怎样将一个平末端DNA片段插入到Eco RI限制位点中去？
106、单项选择题 下列有关基因的叙述，错误的是（）
A、蛋白质是基因表达的唯一产物 B、基因是DNA链上具有编码功能的片段 C、基因也可以是RNA D、基因突变不一定导致其表达产物改变结构 E、基因具有方向性
107、单项选择题 采用BamHI单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（）
A.65℃处理10分钟使BamHI灭活。 B.用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。 C.电泳检测酶切结果。 D.A、B、C都正确。 E.只有A、C正确。
108、问答题 什么是蓝白斑筛选法？
109、单项选择题 用透析膜插片凝胶电泳法回收DNA片段时，再区带前挖一小槽，将透析膜置于槽中，这时应注意（）
A.透析膜要接触DNA区带一侧的胶缘。 B.透析膜不能接触DNA区带一侧的胶缘。 C.透析膜要接触DNA区带相对一侧的胶缘。 D.透析膜不能接触DNA区带相对一侧的胶缘。 E.随意插入槽中即可。
110、填空题 质粒有（）和松弛型两种类型，在克隆基因中常用的是松弛型，在表达研究中常用的是严紧型。
111、问答题 基因工程诞生的理论基础是什么？
112、单项选择题 下列基因调控元件中属于反式调控元件的是（）
A、阻遏蛋白 B、启动子 C、操作子 D、终止子 E、增强子
113、单项选择题 下列有关质粒分子生物学的叙述，错误的是（）
A、质粒是共价环状的双链DNA分子 B、天然质粒一般不含有限制性内切酶的识别序列 C、质粒在宿主细胞内能独立于染色体DNA自主复制 D、松弛复制型的质粒可用氯霉素扩增 E、质粒并非其宿主细胞生长所必需
114、单项选择题 下列有关连接反应的叙述，错误的是（）
A.连接反应的最佳温度为37℃ B.连接反应缓冲体系的甘油浓度应低于10% C.连接反应缓冲体系的ATP浓度不能高于1mM D.连接酶通常应过量2-5倍
115、单项选择题 采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的浮汁中。以下有关叙述，正确的是（）
A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目，等于凝血因子氨基酸数目的3倍 B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵 C.在该转基因羊中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中 D.人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA
116、填空题 甘油浓度是导致一些酶的星活性的原因之一，在酶切时反应体系中的甘油浓度应控制在（）以下。
117、填空题 II型限制酶识别位点一般长度为（）个核苷酸对。
118、单项选择题 基因工程操作的三大基本元件是：（I供体II受体III载体IV抗体V配体）（）
A.I+II+III B.I+III+IV C.II+III+IV D.II+IV+V
119、单项选择题 下列哪项不是将目的基因导入植物细胞的方法（）
A．基因枪法 B．显微注射法 C．农杆菌转化法 D．花粉管通道法
120、多项选择题 pBR322质粒作为基因克隆载体应有下列何种调控元件（）
A.AmPr和Tetr B.ori复制子 C.LacZ标记 D.多克隆位点
121、名词解释 基因探针（probe）
122、问答题 常用的工具酶有哪些？其主要用途是什么？
123、单项选择题 不属于质粒被选为基因运载体的理由是（）
A、能复制 B、有多个限制酶切点 C、具有标记基因 D、它是环状DNA
124、名词解释 双功能抗体
125、单项选择题 第二代基因工程是指（）
A、途径工程 B、代谢工程 C、蛋白质工程 D、RNA基因工程 E、细胞器基因工程
126、单项选择题 珠江三角洲发展外向型经济最主要的合作伙伴是（）
A.港澳地区 B.台湾地区 C.东南亚地区 D.美国
127、单项选择题 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是（I融合基因能稳定扩增II融合蛋白能抗蛋白酶的降解III表达产物易于亲和层析分离）（）
A.III B.I+II C.I+III D.II+III
128、问答题 如何用PCR制备突变DNA分子？
129、填空题 DNA带（）电荷，在电场中从负极向正极移动。
130、单项选择题 DNA被某种酶切割后，电泳得到的电泳带有些扩散，下列原因中，哪一项不太可能？（）
A.酶失活 B.蛋白质（如BSA.同DNA结合 C.酶切条件不合适 D.有外切核酸酶污染
131、问答题 在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变为平端的方法有哪些？
132、问答题 cDNA克隆与基因组克隆有何不同？
133、单项选择题 RFLP产生自（）。
A.使用不同的限制性内切核酸酶 B.每种类型的染色体有两条（二倍体） C.DNA序列中碱基的随机变化 D.Southern印迹 E.不同探针的使用
134、问答题 某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因？
135、问答题 如何有效地提高外源基因的表达效率？
136、单项选择题 用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。
A.Southem印迹杂交 B.Northem印迹杂交 C.Western印迹 D.原位菌落杂交
137、问答题 什么是基因诊断？基因诊断中常用的方法有哪些？试简述其中一种方法的原理。
138、问答题 基因工程在食品工业上有何应用发展？
139、单项选择题 限制性内切酶可特异性识别（）
A.双链DNA的特定碱基对 B.双链DNA的特定碱基序列 C.单链RNA的特定碱基序列 D.单链DNA的特定碱基序列 E.双链RNA的特定碱基对
140、多项选择题 酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（）
A.储存温度不合适 B.稀释后储存 C.储存缓冲液不合适 D.分装后储存 E.储存缓冲液中蛋白浓度低
141、问答题 什么是Western印迹？它与Southern印迹有什么不同？
142、问答题 转基因是一把双刃剑，请客观谈谈对转基因及转基因食品安全性的认识。
143、问答题 什么是基因文库？基因组文库与cDNA文库制备方法有何区别？
144、名词解释 质粒不亲和性
145、问答题 引起核酸变性的因素主要有哪些？核酸变性后性质有何变化？
146、单项选择题 BamHI、XbaI、BglII的识别位点分别是：G↓GATCC、T↓CTAGA、A↓GATCT，哪些酶切结果可产生互补的末端？（）
A.以上几种酶切结果产生的末端都可互补 B.产生的末端都不能互补 C.仅BamHI与BglII的酶切末端互补 D.仅BamHI与XbaI的酶切末端互补 E.仅XbaI与BglII的酶切末端互补
147、问答题 什么是同聚尾连接法？具有哪些优缺点？
148、填空题 受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl2等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许有外源DNA的载体分子通过，这种细胞称为（）。
149、问答题 什么是同聚物加尾连接法？用何种方法加尾？具有哪些优缺点？
150、问答题 YAC载体具有什么样的功能性DNA序列？为什么在克隆大片段时，YAC具有优越性？
151、多项选择题 下列关于同聚物加尾法的说法正确的是（）
A.其核心是利用末端转移酶的功能，将载体和外源DNA的3‘端再加上一端寡核苷酸。 B.不易自身环化。 C.连接效率高 D.适用于CDNA克隆 E.可能会产生某种限制酶切位点。
152、多项选择题 下列关于II类限制酶的叙述正确的是（）
A.它既有内切酶的活性，也有外切酶活性 B.在特异位点对DNA进行切割 C.同一限制酶切割双链DNA时产生相同的末端序列 D.有些限制酶切割双链DNA产生粘末端 E.有些限制酶切割双链DNA产生平末端
153、问答题 试分析提高平端DNA连接效率的可能方法。
154、名词解释 SD序列
155、问答题 什么是复制子？
156、单项选择题 大肠杆菌出现感受态的生理期是（）
A.潜伏期 B.对数期 C.对数后期 D.平衡期 E.衰亡期
157、单项选择题 在分离DNA时，异戊醇的作用是（）
A.使蛋白质脱水 B.使DNA脱水 C.帮助DNA进入水相； D.减少气泡，促进分相
158、多项选择题 酶在储存过程中迅速失活，可能原因是（）
159、单项选择题 生物工程的下游技术是（）
A.基因工程及分离工程 B.蛋白质工程及发酵工程 C.基因工程及蛋白质工程 D.分离工程及蛋白质工程
160、问答题 什么是扣除杂交？其基本原理是什么？
161、单项选择题 需进行DNA部分酶切时，控制下列哪种条件最合适（）
A.反应时间 B.反应体积 C.PH D.限制酶量 E.反应温度
162、单项选择题 下列关于平末端连接的说法正确的是（）
A.同等条件下连接效率高于粘末端连接的连接效率。 B.加入凝聚剂PEG8000可促进平末端连接。 C.平末端连接时反应温度要比粘末端连接温度高。 D.平末端连接方法的使用仅限于酶切后产生的两个平末端之间的连接。 E.平末端连接比粘末端连接更易产生自身环化。
163、名词解释 Cosmid vector:黏粒载体
164、单项选择题 目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是（）
A、质粒DNA B、噬菌体DNA C、病毒DNA D、线粒体DNA E、叶绿体DNA
165、名词解释 Probe：探针
166、问答题 什么是原位菌落杂交（Colony Hybridization）？
167、多项选择题 DNA连接酶的功能是（）
A.恢复3’-OH与5’-P之间的磷酸二酯键 B.恢复缺口 C.恢复裂口 D.可使平末端与粘性末端连接
168、问答题 核酸操作的基本技术有哪些？
169、单项选择题 cDNA第一链合成所需的引物是（）
A、PolyA B、PolyC C、PolyG D、PolyT E、发夹结构
170、填空题 限制性内切酶识别序列具有（），反向重复结构特征。
171、问答题 影响核酸保存的关键因素是什么？怎样保存核酸制品？
172、名词解释 基因芯片（gene chip）
173、问答题 电泳的指示剂和染色剂有何区别，各自的作用是什么？
174、问答题 PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？
175、多项选择题 有关PCR的描述下列哪项正确（）
A.polymerase chainre action的字首缩写 B.1993年获诺贝尔化学奖 C.已广泛的应用于医学各学科 D.能够准确对扩增模板定量 E.以上都对
176、多项选择题 DNA片段重组连接可用下列哪些方法（）
A.平末端连接 B.粘末端连接 C.加接头连接 D.同聚尾连接 E.T载体连接
177、单项选择题 下列哪一种酶作用时需要引物？（）
A.限制酶 B.末端转移酶 C.反转录酶 D.DNA连接酶
178、问答题 如何提高真核基因在原核宿主中的表达效率？
179、问答题 基因工程的定义与特征。
180、单项选择题 的质粒分子带有一个抗菌素抗性基因，该抗性基因在基因工程中的主要作用是（）
A．提高受体细胞在自然环境中的耐药性 B．有利于对目的基因是否导入进行检测 C．增加质粒分子的分子量 D．便于与外源基因连接
181、单项选择题 CDNA、法获得目的基因的优点是（）
A、成功率高 B、不含内含子 C、操作简便 D、表达产物可以分泌
182、单项选择题 下列哪种克隆载体对外源DNA的容载量最大？（）
A.质粒 B.黏粒 C.酵母人工染色体（YAC） D.λ噬菌体
183、单项选择题 下列五个DNA片段中含有回文结构的是（）
A.GAAACTGCTTTGAC B.GAAACTGGAAACTG C.GAAACTGGTCAAAG D.GAAACTGCAGTTTC
184、多项选择题 通过限制性片段分析，可对等位基因进行精确比较是因为（）
A.限制酶只切割两个变异等位基因中的一个 B.限制酶位点可作为遗传标记 C.它不依赖变异的等位基因的产物的功能 D.不同组织等位基因的核苷酸序列存在差异 E.同一组织等位基因核苷酸序列不会完全相同
185、单项选择题 下列获取目的基因的方法中需要模板链是（）
A.从基因文库中获取目的基因 B.利用PCR技术扩增目的基因 C.反转录法 D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成
186、填空题 在沉淀DNA时，常用2倍体积的无水乙醇。若反应体系中无单价离子存在，常加入1/10体积的3MNaAc或KAc，其作用是中和DNA上的负电荷，减小排斥力，使其易于（）。
187、填空题 DNA分子标记的方法有（）；（）、末端标记法、交换反应标记法四种。
188、问答题 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优缺点是什么？
189、单项选择题 在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（）
A.I类限制酶 B.II类限制酶 C.III类限制酶 D.核酸内切酶 E.RNAase
190、问答题 Southern杂交一般过程及影响杂交因素。
191、单项选择题 限制性核酸内切酶是由细菌产生的，其生理意义是（）
A.修复自身的遗传缺陷 B.促进自身的基因重组 C.强化自身的核酸代谢 D.提高自身的防御能力
192、单项选择题 某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有（）
A.4个 B.3个 C.2个 D.至少2个
193、单项选择题 限制性内切核酸酶的星活性是指（）
A.在非常规条件下，识别和切割序列也不发生变化的活性。 B.活性大大提高 C.切割速度大大加快 D.识别序列与原来的完全不同
194、问答题 作为基因工程载体，其应具备哪些条件？
195、单项选择题 生物工程的上游技术是（）
A.基因工程及分离工程 B.基因工程及发酵工程 C.基因工程及细胞工程 D.基因工程及蛋白质工程
196、单项选择题 分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（）
A.单酶切产物 B.双酶切产物 C.同裂酶产物 D.PCR产物 E.酶切后形成的平末端产物
197、单项选择题 用同一种酶切割载体和目的基因后进行连接，连接产物会含大量自身环化载体，采用下列哪种酶处理，可防止自身环化（）
A.核酸内切酶 B.核苷酸激酶 C.核酸外切酶 D.末端转移酶 E.碱性磷酸酶
198、单项选择题 第一个作为重组DNA载体的质粒是（）
A.pBR322 B.ColEl C.pSCl01 D.pUCl8
199、单项选择题 下列与RFLP相关的一条是（）
A.不同限制酶在单个染色体DNA上的限制性图谱。 B.两种物种个体间的限制性图谱。 C.同一个体等位基因的限制性图谱。 D.同一物种不同个体的限制性图谱。 E.非同源染色体用同种限制酶切形成的限制酶图谱。
200、名词解释 cDNA library:cDNA文库
201、多项选择题 限制酶反应结果若显示没有切割，可能原因是（）
A.限制酶无活性 B.存在抑制剂如SDS，EDTA C.DNA不纯 D.缓冲液组成不合适 E.DNA甲基化
202、名词解释 重组子
203、多项选择题 限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（）
A.限制酶失活 B.有抑制剂如SDS，EDTA等存在 C.反应条件不合适 D.DNA不纯 E.DNA结构（线形或超螺旋）的影响
204、单项选择题 如果一个限制酶识别长度为6bp，则其在DNA上识别6bp的切割概率为（）
A.1/44 B.1/66 C.1/64 D.1/46 E.1/106
205、问答题 酚与氯仿联合使用的好处？
206、问答题 何谓限制性核酸内切酶？写出大多数限制性核酸内切酶识DNA序列的结构特点。
207、多项选择题 下列哪些补体调节因子具有使机体正常组织细胞免受补体介导的损伤作用的功能()
A．B因子 B．MCP C．CR1 D．C8bp E．CD59
208、问答题 如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记？
209、单项选择题 启动子的特征之一是（）
A、GC富积区 B、TATABox C、转录起始位点 D、长度平均1kb E、含有某些稀有碱基
210、问答题 什么是基因组文库（genomiclibrary）？它同遗传学上的基因库有什么不同？
211、名词解释 同裂酶（同切点酶）
212、问答题 何谓接头连接法？
213、名词解释 同尾酶
214、名词解释 RACE
215、单项选择题 从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是（）
A.抑制核酸酶的活性 B.保护DNA，防止断裂 C.加速蛋白质变性 D.有利于细胞破碎
216、问答题 如果用EcoRI酶切DNA时出现星活性，试分析原因？
217、单项选择题 在DNA分子克隆时，常用到部分填补法，填补时应注意（）
A.控制反应温度 B.控制酶的反应时间 C.控制DNA聚合酶的用量 D.控制反应PH E.限制dNTP的种类
218、名词解释 柯斯（C0S）质粒
219、问答题 当两种限制性内切核酸酶的作用条件不同时，若要进行双酶切，应采取什么措施？为什么？
220、问答题 简述Sanger双脱氧链终止法的基本原理。（聚丙烯酰胺凝胶电泳模式图）
221、单项选择题 外源基因在大肠杆菌中以融合蛋白的形式表达的优点是（） I融合基因能稳定扩增；II融合蛋白能抗蛋白酶的降解；III表达产物易于亲和层析分离
A、III B、I+II C、I+III D、II+III E、I+II+III
222、单项选择题 载体的功能是（I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力）（）
A.I B.I+III C.II+III D.I+II+III
223、单项选择题 关于cDNA的不正确的提法是（）
A.同mRNA互补的单链RNA B.同mRNA互补的含有内含子的DNA C.以mRNA为模板合成的双链RNA D.以上都不正确
224、名词解释 RT-PCR：逆转录PCR
225、单项选择题 下面关于限制性核酸内切酶的表示方法中，正确的一项是（）。
A.Sau3AI B.E.coRI C.hindIII D.Sau3AI
226、名词解释 转化子（transformant）
227、问答题 质粒的不相容性及其分子机理。
228、问答题 基因工程的操作过程的主要步骤包括哪些？
229、问答题 怎样将一个平末端的DNA片段插入到EcoRI的限制位点中去？
230、单项选择题 若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入（）
A、半乳糖 B、葡萄糖 C、蔗糖 D、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal） E、异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）
231、问答题 限制性核酸内切酶的活性受哪些因素影响？
232、单项选择题 包涵体是一种（）
A、受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒 B、大肠杆菌的亚细胞结构 C、噬菌体或病毒DNA的体外包装颗粒 D、用于转化动物细胞的脂质体 E、外源基因表达产物的混合物
233、问答题 启动子从转录模式上可分为哪两种？表达系统常选用哪一种？其机理是什么？
234、单项选择题 黏性末端连接法，不仅操作方便，而且（）
A.产生新切点 B.易于回收外源片段 C.载体不易环化 D.影响外源基因的表达
235、多项选择题 构建载体时，使用双酶切相对于单酶切的优点在于（）
A.避免载体自身环化 B.提高连接效率 C.控制外源基因的插入方向 D.便于转化后的筛选 E.便于修改阅读框
236、单项选择题 下列属于获取目的基因的方法的是（） ①利用mRNA反转录形成②从基因组文库中提取 ③从受体细胞中提取④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录⑥人工合成
A.①②③⑤ B.①②⑤⑥ C.①②③④ D.①②④⑥
237、单项选择题 为什么使用限制性内切核酸酶对基因组DNA进行部分酶切？（）
A.为了产生平末端 B.为了产生黏末端 C.只切割一条链上的酶切位点，产生开环分子 D.可得到比完全酶切的片段略短的产物 E.可得到比完全酶切的片段略长的产物
238、单项选择题 下面哪一种不是产生星号活性的主要原因？（）
A.甘油含量过高 B.反应体系中含有有机溶剂 C.含有非Mg2+的二价阳离子 D.酶切反应时酶浓度过低
239、问答题 大肠杆菌作为外源基因表达系统有哪些优缺点？
240、问答题 用酚抽提蛋白质时，离心后，为什么蛋白质总是会停留在水相和酚相之间？
241、问答题 DNA诱变有哪些种类，各有何特点？
242、单项选择题 粘末端连接的优点是操作简便且（）
A.可产生新的酶切位点 B.载体易自身环化 C.易于回收片段 D.具有方向性 E.选时更简便
243、单项选择题 基因工程菌中重组质粒的丢失机制是（）
A、重组质粒渗透至细胞外 B、重组质粒被细胞内核酸酶降解 C、重组质粒在细胞分裂时不均匀分配 D、重组质粒杀死受体细胞 E、重组质粒刺激受体细胞提高其通透性
244、单项选择题 在回收DNA片段时，观察电泳结果为尽量减少对DNA的照射损伤应使用（）
A.长波长紫外 B.短波长紫外 C.长波长红外 D.短波长红外 E.ABCD都不可
245、问答题 载体的类型主要有哪些？在基因工程操作中如何选择载体？
246、问答题 生产限制性内切酶的细菌如何保护自己的DNA不被降解？
247、单项选择题 多数限制酶消化DNA的最佳温度是（）
A.37℃ B.30℃ C.25℃ D.16℃ E.33℃
248、单项选择题 克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因）（）
A.I+II B.I+III C.II+III D.I+II+III
249、填空题 为提高重组转化效果，对同一种酶切后载体进行（）处理。
250、名词解释 限制性核酸内切酶
251、单项选择题 有关基因工程的叙述中，错误的是（）
A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来 B、限制性内切酶用于目的基因的获得 C、目的基因须由运载体导入受体细胞 D、人工合成目的基因不用限制性内切酶
252、问答题 以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体？
253、单项选择题 哪项不是基因表达载体的组成部分（）
A.启动子 B.终止密码 C.标记基因 D.目的基因
254、单项选择题 基因工程操作常用的酶是：（I内切酶II连接酶III末端转移酶IV聚合酶）（）
A.I+II B.I+III+IV C.II+III+IV D.I+II+IV+III
255、问答题 如何提高克隆基因的表达水平？
256、问答题 基因工程中常用的DNA聚合酶主要有哪些？
257、问答题 克隆基因目的蛋白的表达的形式主要有哪些类型？
258、多项选择题 如果DNA分子重组时，需要用平端连接，下列哪些方法可形成平末端（）。
A.3‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。 B.3‘突出的粘末端用核酸酶切平。 C.5‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。 D.5‘突出的粘末端用核酸酶切平。 E.利用切口为平末端的限制酶。
259、单项选择题 Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（）
A.dGTP B.dATP C.dCTP D.dTTP
260、名词解释 Shuttle plasmid vector:穿梭质粒载体
261、单项选择题 天然 PstI 限制性内切酶的来源是 （）
A、Bacillus amyloliquefaciens B、Escherichia coli C、Haemophilus influenzae D、Providencia stuartii E、Streptomyces lividans
262、单项选择题 用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）
A.染色体DNA断成了碎片 B.染色体DNA分子量大，而不能释放 C.染色体变性后来不及复性 D.染色体未同蛋白质分开而沉淀
263、问答题 小量制备质粒DNA，用质粒中特定的酶切发现切割不动，试分析可能原因及克服方法？
264、单项选择题 某一重组D、NA、（6.2kB）的载体部分有两个SmA、I酶切位点。用SmA、I酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmA、I酶切位点共有（）
A、4个 B、3个 C、2个 D、至少2个
265、问答题 重组DNA技术常包括哪些基本步骤？
266、问答题 试述基因工程技术的发展方向？
267、问答题 简述包含体形成的原因和包含体蛋白复性的主要步骤。
268、问答题 什么是原位杂交技术？其基本过程如何？
269、多项选择题 下列关于限制酶的叙述正确的是（）
A.在限制与修饰系统中，修饰主要是甲基化作用，一旦位点被甲基化了，其他限制酶就不能切割了。 B.限制酶在DNA中的识别/切割位点的二、三级结构影响酶切效率。 C.如果限制酶的识别位点位于DNA分子末端，那么接近末端的程度也影响切割。 D.已知某限制酶在一环状DNA上有3个切点，因此该酶切割这一环状DNA，可得到3个片段。 E.能产生防御病毒侵染的限制酶的细菌，其自身的基因组中没有该酶识别的序列。
270、单项选择题 某一重组DNA的载体部分有两个BamHI酶切位点。用BamHI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的BamHI酶切位点共有（）
A.4个 B.3个 C.1个 D.2个
271、问答题 试述5′RACE技术原理和方法。
272、填空题 用火药爆炸或者高压气体加速将包裹了DNA的球状金粉或者钨粉颗粒直接送入完整的植物组织或者细胞中，这一方法称为（）。
273、多项选择题 关于II类限制酶说法正确的是（）
A.具内切核酸酶和甲基化酶活性 B.仅有内切核酸酶活性 C.只识别非甲基化的DNA序列 D.II类限制酶反应条件只需要Mg2+ E.II类限制酶反应需要Mg2+，ATP
274、问答题 为什么用原核表达系统表达真核生物的蛋白质时，克隆的真核基因不能来自基因组文库？真核基因应如何获得？
275、单项选择题 关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，（）项不是主要原因。
A.底物（模板）过剩 B.dNTP的大量消耗 C.产物的聚集 D.非特异性产物的竞争性抑制
276、问答题 解释质粒，为什么质粒可作为基因载体。
277、问答题 可采用哪些方法进行目的片段与载体的连接？
278、单项选择题 关于限制性内切核酸酶的来源及其天然存在的意义，下列哪种说法是正确的？（）
A.来自噬菌体，用于复制病毒DNA B.来自噬菌体，具有抗微生物作用 C.来自酵母菌，参与DNA复制 D.来自细菌，有防御病毒侵染的意义 E.是细菌内的DNA复制酶
279、名词解释 cDNA文库
280、单项选择题 利用毛细管作用原理，将凝胶电泳分离后的DNA片段转移至硝酸纤维素膜上并根据核酸杂交原理进行分析的技术是（）
A、Western印迹转移技术 B、Northern印迹转移技术 C、基因的表现型分析法 D、Southern印迹转移技术
281、问答题 重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。
282、单项选择题 T4-D、NA、连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段D、NA、片段连接在一起，其底物的关键基团是（）
A、2’-OH和5’–P B、2’-OH和3’-P C、3’-OH和2’–P D、5’-OH和3’-P
283、问答题 杂交液的成分是什么？
284、单项选择题 λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（）
A.小于λ噬菌体DNA的50% B.小于噬菌体DNA的75% C.大于λ噬菌体DNA的105% D.为λ噬菌体DNA的75%～105%
285、填空题 在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为（）性克隆。
286、问答题 大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？
287、填空题 限制性内切酶通常保存在（）浓度的甘油溶液中。
288、单项选择题 下列各组用于外源基因表达的受体细胞及其特点的对应关系中，错误的是（）
A.大肠杆菌－繁殖迅速 B.枯草杆菌－分泌机制健全 C.链霉菌－遗传稳定 D.酵母菌－表达产物具有真核性
289、单项选择题 多聚接头（Polylinker）指的是（）
A.含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工DNA片段 B.含有多种复制起始区的人工DNA片段 C.含有多种SD顺序的人工DNA片段 D.含有多种启动基因的人工DNA片段
290、单项选择题 线性质粒复制的引物来自于（）
A.细胞中合成的小分子RNA B.自身末端的端粒序列 C.外加的寡聚DNA D.自身断裂的小分子DNA
291、名词解释 目的基因（objective gene）
292、问答题 什么是蓝白斑筛选？其原理是什么？
293、问答题 什么是包涵体？
294、单项选择题 T4-DNA连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA片段连接在一起，其底物的关键基团是（）
A.2’-OH和5’–P B.2’-OH和3’-P C.3’-OH和5’–P D.5’-OH和3’-P2
295、单项选择题 基因工程的单元操作顺序是（）
A、增，转，检，切，接 B、切，接，转，增，检 C、接，转，增，检，切 D、检，切，接，增，转 E、切，接，增，转，检
296、多项选择题 下列因素中影响限制酶切割的有（）
A.EDTA浓度 B.甘油浓度 C.DNA纯度 D.酶的自身活性 E.盐浓度
297、问答题 常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？
