1、填空题  请回答下列关于微生物的问题：
(1)“闻着臭，吃着香”的臭豆腐驰名中外，其制作过程中所用的微生物主要是_______________。在制作过程中，加盐的作用是____________________。臭豆腐表面往往有一层致密的皮，这层皮实际上是微生物的__________，它对人体是无害的。
(2)欲从土壤中分离高效降解有机磷农药的细菌，可在培养基中加入有机磷农药制成__________培养基进行分离；若想对初步筛选得到的目的菌进行纯化并计数，可采用的接种方法是_____________。
(3)Taq细菌1966年被发现于美国黄石国家公园，它的发现促成了PCR技术的自动化，这是因为它为PCR技术提供了_________。PCR技术是DNA循环复制的过程，每次循环可以分为__________________三步。
(4)微生物培养过程中，除考虑菌体生长的条件(_______________)外，还要防止外来杂菌的入侵，所以要灭菌，其中对培养皿进行灭菌常用的方法是___________________，对培养基则用_____________。

参考答案：(1)毛霉? 析出水分，使豆腐块变硬；抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质? 菌丝
(2)选择? 稀释涂布平板法
(3) Taq DNA聚合酶? 变性、复性、延伸
(4)营养、氧气、pH? 干热灭菌? 高压蒸汽灭菌

本题解析：

本题难度：一般

2、选择题  如图为DNA变性和复性示意图，下列相关说法正确的是

[? ]
A．向右的过程为加热(80～100℃)变性的过程
B．向左的过程是DNA双链迅速致冷复性
C．变性与在生物体内解旋过程的条件、实质都相同
D．图中DNA片段共有4个游离的磷酸基、4个3′端

参考答案：A

本题解析：

本题难度：一般

3、连线题  请回答基因工程方面的有关问题：
(1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似(如下图所示)。图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为_______。
②在第_______轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。

(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图)，请分别说明理由。
?
①第1组：_______；②第2组：_________。
(3)PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为__________。
(4)用限制酶EcoRⅤ、MboⅠ单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1kb 即1000个碱基对)，请在直接在下图的质粒上画出EcoRⅤ、MboⅠ的切割位点。

参考答案：(1)①15/16；②三 ?
(2)①引物I和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效；②引物I’自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效
(3)?DNA聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链DNA片段的引物链上
(4)见下图

本题解析：

本题难度：困难

4、选择题  (附加题)下列关于PCR技术的叙述，正确的是

[? ]

参考答案：D

本题解析：

本题难度：一般

5、连线题  DNA在NaCl溶液中的溶解度有二重性，随着NaCl溶液浓度的变化而变化。
(1)请在下列不同浓度的NaCl溶液中选出能使DNA溶解度最高的一种是______。
A．0.14mol/L?B．2mol/L?C．0.15mol/L?D．0.3mol/L
(2)DNA不溶于酒精溶液，但细胞中的某些物质却可以溶于酒精溶液，利用这一原理可以________________，可以推测溶于酒精中的物质可能有________________。
(3)利用DNA遇________呈蓝色的特性，将该物质作为鉴定________的试剂。其实验过程要点是向放有____________的试管中加入4mL的__________。混合均匀后，将试管置于________5min，待试管________，观察试管中溶液颜色的变化，这个实验也说明DNA耐________温。
(4)PCR一般要经历三十多次循环，每次循环可分为________、________、________三个步骤。DNA的羟基(-OH)末端称为________。PCR技术与细胞内DNA复制在解旋时原理不同：细胞内复制利用________使双链间氢键断裂，而PCR技术利用________原理，使双链氢键断裂，DNA的合成方向总是从子链的________端向________端延伸。
(5)一个由32P标记的DNA分子，放在未标记的环境中培养，复制5次后，标记的DNA分子占DNA分子总数的________。假定DNA片段含200对脱氧核苷酸，经3次扩增，从理论上计算需要________个游离脱氧核苷酸，若某样品DNA中共有3000个碱基对，其碱基数量满足：(A+T)：(G+C)=1/2，现欲得到1000个拷贝(与样品相同的DNA)，至少需要向试管中加入________个腺嘌呤脱氧核苷酸。
(6)DNA扩增过程中，DNA片段经若干次扩增，与其数目的理论值变化相符的图是______。

参考答案：(1)B
(2)除去杂质；某些脂质、蛋白质、糖类或其他大分子物质
(3)二苯胺；DNA；DNA；二苯胺试剂；沸水中水浴加热；冷却后；高
(4)变性；复性；延伸；3′端；解旋酶；热变性；5′端；3′端
(5)1/16；2800；999000
(6)C

本题解析：

本题难度：一般