1、连线题 苏云金杆菌是一种对昆虫有毒害作用的细菌,其杀虫活性物质主要是一类伴孢晶体蛋白。伴孢晶体蛋白经昆虫肠液消化成毒性肽,并因此导致昆虫死亡。自1993年培育转基因植物抗虫棉成功后,研究者又将抗虫基因成功地导入水稻细胞中。在培育转基因植物的研究中,抗除草剂基因(bar)常作为标记基因。这样培育出来的转基因水稻既能抗虫又能抗除草剂,便于田间管理。图为获得转基因水稻的技术流程,请据图回答:
(1)水稻细胞的基因结构与苏云金杆菌有所不同,其主要特点是____________。
(2)要获得该抗虫基因,可采用_________、_________等方法。
(3)假如运载体被切割后,得到的分子末端序列为则能与该运载体连接的抗虫基因分子末端序列是_______。
(4)C过程的水稻细胞经过__________形成愈伤组织。培养基中除了含有必要营养物质、琼脂和激素外,还必须加入________。该培养基从用途上看属于_________。
(5)如果抗虫基因在水稻细胞中成功表达,请用中心法则形成表示该基因的表达过程。______________。
(6)种植上述转基因植物,它所携带的目的基因可能通过花粉传递给近缘物种,造成“基因污染”。如果把目的基因导入叶绿体DNA中,就可以避免“基因污染”,原因是____________________。
2、连线题 白细胞介素是一类淋巴因子。研究人员将人白细胞介素的基因导入到酵母细胞中,使其分泌出有活性的人白细胞介素。
(1)在体液免疫过程中,白细胞介素是由____________细胞分泌的,可作用于受到抗原刺激的B细胞,使B细胞增殖、分化,形成___________细胞。
(2)目的基因获取:从健康人体外周静脉血分离得到淋巴细胞,于37℃培养48h,提取细胞总RNA,生成cDNA。根据已知目的基因的核苷酸序列合成引物,通过PCR扩增获取目的基因,此时需要加入的反应物与生成eDNA时所加反应物不同的是__________。
(3)重组载体的构建:用两种限制酶EcoR1与EcoR52处理载体和目的基因后,用__________酶处理,形成重组载体。该载体与细胞膜载体的化学本质分别是_____________和____________。
3、填空题 限制内切酶I的识别序列和切点是—G↓GATCC—,限制性内切酶II的识别序列和切点是—↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点,在目的基因的两侧各有1个酶Ⅱ的切点。用上述两种酶分别切割质粒和含有目的基因的DNA。
(1)请画出质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端。
(2)请画出目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端。
(3)在DNA连接酶的作用下,上述两种不同限制酶切割后形成的黏性末端能否连接起来?为什么?
4、填空题 (选做题)基因工程又叫基因拼接技术。请回答下列问题:
(1)在该技术中,用人工合成方法获得目的基因的途径之一是:以目的基因转录的_________为模板,_________成互补的单链DNA,然后在酶的作用下合成_________。
(2)基因工程中常用的受体细胞有细菌、真菌、_________。
(3)假设以大肠杆菌质粒作为运载体,并以同一种限制性核酸内切酶切割运载体与目的基因,将切割后的运载体与目的基因片段混合,并加入DNA连接酶。连接产物至少有_________种环状DNA分子,它们分别是_____________、_____________、_____________环状DNA分子。
5、选择题 在基因工程操作中限制性核酸内切酶是不可缺少的工具。下列有关限制性核酸内切酶的叙述错误的是
[? ]
A.一种限制性核酸内切酶只能识别一种特定的脱氧核苷酸序列
B.限制性核酸内切酶的活性受温度和pH等因素的影响
C.限制性核酸内切酶可以从某些原核生物中提取
D.限制性核酸内切酶也可以识别和切割RNA
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