1、连线题  2009年10月，我国自主研发的转基因抗虫水稻“华恢1号”获得农业部颁发的安全证书。下图表示该抗虫水稻主要培育流程，据图回答：

(1)④过程应用的主要生物技术是_____________。
(2)杀虫基因(crylA)是人们根据几种Bt毒蛋白的分子结构，设计并人工合成的，这属于____________工程技术范畴。
(3)组建理想的载体需要对天然的质粒进行改造。下图是天然土壤农杆菌Ti质粒结构示意图(图示部分基因及部分限制酶作用位点)，据图分析：

①．人工改造时，要使抗虫基因表达，还应插入_____________。
②．人工改造时用限制酶Ⅱ处理，其目的是：第一，去除质粒上的________(基因)，保证T-DNA进入水稻细胞后不会引起细胞的无限分裂和生长；第二，使质粒带有单一限制酶作用位点，有利于________。第三，使质粒大小合适，可以提高转化效率等。
③若用限制酶Ⅱ分别切割改造过的理想质粒和带有抗虫基因的DNA分子，并构成重组Ti质粒。分别以含四环素和卡那霉素的培养基培养已成功导入抗虫基因的水稻胚细胞，观察到的细胞生长的现象是_____________。
(4)若限制酶Ⅱ切割DNA分子后形成的黏性末端为，则该酶识别的核苷酸序列是____________。

参考答案：(1)植物组织培养?
(2)蛋白质?
(3)①．启动子?
②．tetr、tms和tmr? 目的基因(或外源DNA)准确插入?
③．在含卡那霉素的培养基中能够生长，而在含四环素的培养基中不能生长?
(4)GACGTC

本题解析：

本题难度：一般

2、填空题  香蕉原产于热带地区，是我国南方重要的经济作物之一。广东省冬季常受强寒潮和霜冻影响，对香蕉生长发育影响很大。由香蕉束顶病毒(BBTV，单链环状DNA病毒)引起的香蕉束顶病，对香蕉产生的危害十分严重。当前香蕉栽培品种多为三倍体，由于无性繁殖是香蕉繁育的主要方式，缺少遗传变异性，因此利用基因工程等现代科技手段提高其种质水平，具有重要意义。请根据上述材料，回答下列问题。
(1)简述香蕉大规模快速繁殖技术的过程。_____________________________。
(2)脱毒香蕉苗的获得，可采用__________的方法，此方法的依据是___________和___________。
(3)建立可靠的BBTV检测方法可以监控脱毒香蕉苗的质量，请问可用哪些方法检测病毒的存在？_________________(列举两种方法)。
(4)在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值，该基因可以从这些鱼的DNA中扩增得到。试述在提取和纯化DNA时影响提纯效果的因素及其依据。___________________(列举两点)。
(5)如何利用afp基因，通过转基因技术获得抗寒能力提高的香蕉植株？在运用转基因香蕉的过程中，在生态安全方面可能会出现什么问题？________________(列举两点)。
(6)从细胞工程的角度出发，简述一种培育抗寒香蕉品种的方法及其依据。__________________。另外，抑制果胶裂解酶的活性可以延长香蕉果实储藏期，请描述采用蛋白质工程技术降低该酶活性的一般过程。__________________。

参考答案：(1)选取香蕉外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后通过调整植物激素比例，使其再分化形成芽和根，获得大量试管苗(或通过诱导形成大量胚状体，制成人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗)。
(2)茎尖(分生组织)组织培养? 茎尖不带病毒(或病毒在植物体内分布不均匀)? 植物细胞全能性
(3)①．BBTV病毒基因的检测(DNA分子杂交技术)；
②．BBTV病毒蛋白的检测(获得抗血清，利用抗原一抗体的杂交反应，判断病毒是否存在)。
(4)(答出两点即可)
①．选择NaCl溶液的合适浓度，利用DNA和其他杂质在不同NaCl溶液中溶解度不同的特性，达到分离目的；
②．加入一定量酒精，使部分蛋白质杂质溶解于酒精，与DNA分离；
③．加入蛋白酶，除去蛋白质杂质的干扰；
④．控制DNA提取的温度，使大多数蛋白质杂质变性。
(5)(答出两点即可)
将afp基因插入土壤农杆菌的质粒，构建表达载体，通过农杆菌的转化导入香蕉受体细胞，成功转化的香蕉细胞通过组织培养形成植株。生态安全问题包括：
①．外源基因扩散到其他物种(外源基因漂移)；
②．转基因植株扩散影响生态系统的结构和功能；
③．转基因植株扩散对生物多样性的影响；
④．转基因植物残体或分泌物对环境的影响。
(6)体细胞杂交育种，其依据是将不同品种的香蕉体细胞利用细胞融合技术融合成杂种细胞后培育出抗寒香蕉品种(或体细胞诱变育种，其依据是利用诱变剂等方法使香蕉离体培养细胞发生基因突变，然后筛选培育出抗寒品种)。
蛋白质工程方法的步骤为：
①．果胶裂解酶蛋白的功能分析；
②．果胶裂解酶蛋白的结构预测和设计；
③．果胶裂解酶基因的改造。

本题解析：

本题难度：困难

3、选择题  蛋白质工程的基础是
[? ]
A．发酵工程
B．细胞工程
C．胚胎工程
D．基因工程

参考答案：D

本题解析：

本题难度：简单

4、选择题  下列关于蛋白质工程的说法不正确的是
[? ]
A．蛋白质工程能定向改造蛋白质分子的结构，使之更加符合人类的需要
B．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构
C．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子
D．蛋白质工程是基因工程的延伸，又被称为第二代基因工程

参考答案：B

本题解析：

本题难度：简单

5、连线题  降钙素是一种多肽类激素，临床上用于治疗骨质疏松症等。人的降钙素活性很低，半衰期较短。某科学机构为了研究一种活性高、半衰期长的新型降钙素，从预期新型降钙素的功能出发，推测相应的脱氧核苷酸序列，并人工合成了两条72个碱基的DNA单链，两条链通过18个碱基对形成部分双链DNA片段，再利用Klenow酶补平，获得双链DNA，过程如下图。在此过程中发现，合成较长的核苷酸单链易产生缺失碱基的现象。分析回答下列问题：

(1)Klenow酶是一种__________酶，合成的双链DNA有___________个碱基对。
(2)获得的双链DNA经EcoRⅠ(识别序列和切割位点-G↓AATTC-)和BamHⅠ(识别序列和切割位点-G↓GATCC-)双酶切后插入到大肠杆菌质粒中，筛选含重组质粒的大肠杆菌并进行DNA测序验证。
①．大肠杆菌是理想的受体细胞，这是因为它____________。
②．设计EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切的目的是____________。
③．要进行重组质粒的鉴定和选择，需要大肠杆菌质粒中含有___________。
(3)经DNA测序表明，最初获得的多个重组质粒，均未发现完全正确的基因序列，最可能的原因是_____。
(4)上述制备该新型降钙素，运用的现代生物工程技术是___________。

参考答案：(1) DNA聚合 ? 126
(2)①．繁殖快、单细胞、遗传物质相对较少
②．保证目的基因和载体定向连接(或防止目的基因和载体在酶切后产生的末端发生任意连接)
③．标记基因?
(3)合成的核苷酸单链仍较长，产生缺失碱基的现象
(4)蛋白质工程

本题解析：

本题难度：困难