1、连线题  红细胞生成素(EPO)是体内促进红细胞生成的一种糖蛋白，可用于治疗肾衰性贫血等疾病。由于天然EPO来源极为有限，目前临床上使用的红细胞生成素主要来自于基因工程技术生产的重组人红细胞生成素(thEPO)，其简要生产流程如图。

请回答：
(1)图中①所指的是________技术。
(2)图中②所指的物质是________，③所指的物质是_______。
(3)培养重组CHO细胞时，为便于清除代谢产物，防止细胞产物积累对细胞自身造成危害，应定期更换_______。
(4)检测thEPO的体外活性需用抗thEPO的单克隆抗体。分泌该单克隆抗体的______细胞，可由thEPO免疫过的小鼠B淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合而成。

参考答案：(1)PCR
(2)mRNA? thEPO
(3)培养液
(4)杂交瘤

本题解析：

本题难度：一般

2、选择题  变性作用是指核酸双螺旋结构被破坏，双链解开，但共价键并未断裂。引起变性的因素有很多，升高温度、过酸、过碱、纯水以及加入变性剂等都能造成核酸变性。PCR的反应过程中，引起变性的因素是

[? ]

参考答案：C

本题解析：

本题难度：一般

3、选择题  PCR操作中，从第二轮循环开始扩增的DNA片段

[? ]

参考答案：A

本题解析：

本题难度：简单

4、填空题  (选做题)为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等已经列入了我国未来10年的发展计划。
　　广东省是我国甘蔗的主产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)请根据上述材料，回答下列问题：
(1)简述甘蔗大规模快速繁殖技术的过程。
(2)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意_____和_____，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据_______筛选出突变菌。
(3)上述步骤2、3和4的依据分别是_________________。
(4)利用获得的突变菌和蔗汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间洁净外，发酵过程中防止外来杂菌入侵还有哪些可行方法？(列举两种)
(5)甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是其___________。请提出解决该问题的方法。(列举两种方法)
(6)突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物和DNA聚合酶的作用分别是什么？

参考答案：(1)选取甘蔗外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后调整植物激素比例，再分化形成芽和根，获得大量试管苗(或通过诱导大量形成胚状体，制成人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗)。
(2)步骤二：添加高浓度蔗糖(葡萄糖)? ? 调低pH值? 步骤四：是否能在选择培养基上生长
(3)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长代表该菌落具有耐高糖和耐酸的特性
(4)①．利用突变菌的耐酸特性，降低培养基的pH值，达到抑菌的日的；②．利用突变菌的耐高糖特性，通过高渗环境达到抑菌目的；③．保持厌氧环境，达到抑菌目的；④．在培养基中添加一些抑制物如特殊的抗生素，达到抑菌目的。
(5)缺乏相应分解酶系(或缺乏纤维素和半纤维素酶)在酵母菌中转入分解酶系相关基因，利用酶或微生物分解蔗渣；利用物理和化学方法分解蔗渣；将酵母菌与其他能分解蔗渣的微生物混合发酵。
(6)引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点；DNA聚合酶的作用是从引物的3′端开始催化DNA链的延伸。

本题解析：

本题难度：困难

5、连线题  近年来自然灾难频频出现，部分遇难者的遗体由于没有及时被发现，而无法直接辨认，身份鉴定者通常要用到PCR技术。回答以下问题：
(1)与体内DNA复制相比，PCR技术用到的酶(称酶X)的最大特点是________，不用_________酶。
(2)酶X催化合成的键是__________，该酶能使________从引物的________端开始连接。
(3) PCR反应一轮循环要经过___________三步，分析PCR反应过程可知：酶X催化合成的键与DNA中碱基与碱基直接相连的键相比，对高温较稳定的是___________(填“前者”或“后者”)。
(4)下图列出的两条DNA分子来源于同一个DNA分子，则这两条DNA是第______次循环的产物。

(5)体外扩增某个基因片段(共有1 000个脱氧核苷酸对)，所用的引物I和引物Ⅱ中共有50个脱氧核苷酸，则扩增5代需要消耗游离的脱氧核苷酸____________个。
(6)对死者遗体内分离出来的DNA进行体外扩增，为确保PCR反应液中全部是死者的DNA，PCR实验中用到的器械和试剂等在使用前要_____________处理。

参考答案：(1)耐高温? ? 解旋
(2)磷酸二酯键? ?脱氧核糖核甘酸? 3′
(3)变性、复性和延伸? ?前者
(4)1
(5)60450
(6)(高温)灭菌

本题解析：

本题难度：一般