1、名词解释  S-D Sequence:S-D序列

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本题答案：在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始
本题解析：试题答案在大肠杆菌mRNA的核糖体结合位点上，含有一个转译起始密码子及同16S核糖体RNA3，末端碱基互补的序列，该序列最初由Shine、Dalgarno发现，故后来命名为Shine—Dalgarno序列，简称S-D序列。

2、问答题  基因工程在食品工业上有何应用发展？

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本题答案：主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调
本题解析：试题答案主要是通过基因重组，使各种转基因生物提高生产谷氨酸、调味剂、酒类和油类等有机物的产率；或者改良这些有机物组成成分，提高利用价值。

3、单项选择题  下列哪一种酶作用时需要引物？（）

A.限制酶
B.末端转移酶
C.反转录酶
D.DNA连接酶

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

4、多项选择题  如果DNA分子重组时，需要用平端连接，下列哪些方法可形成平末端（）。

A.3‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。
B.3‘突出的粘末端用核酸酶切平。
C.5‘突出的粘末端用DNA聚合酶加dNTPs填平。
D.5‘突出的粘末端用核酸酶切平。
E.利用切口为平末端的限制酶。

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本题答案：B, C, D, E
本题解析：暂无解析

5、问答题  如何提高真核基因在原核宿主中的表达效率？

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本题答案：（1）选择合适载体，提高翻译水平
强启动子&
本题解析：试题答案（1）选择合适载体，提高翻译水平
强启动子——提高转录水平
核糖体结合位点（ATG-SD）距离合适
在基因重组过程中应将结构基因接于SD序列之后．以便为mRNA提供核糖体结合位点，提高真核基因表达效率。
避免产物降解：分泌/融合表达；（融合蛋白表达后再去除原核肽段）
（2）选择合适宿主（如Lac启动子——LacI菌；PL/PR——CI857溶源菌）
（3）调节宿主细胞代谢
为保持宿主正常生长速度及重组转化体稳定性，维持产物的高效表达，必需采用适当方法，调节细胞代谢。目前，调节细胞代谢方法很多。如营养物浓度控制、产物诱导表达、载体诱导复制及促进产物分泌等。

6、填空题  当目的片段无限长时，使用识别碱基数为4和6的限制性内切酶进行切割时，理论上产生的片段数之比是（）。

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本题答案：16：1
本题解析：试题答案16：1

7、问答题  在重组DNA操作中为了提高连接效率常常将非互补的黏性末端修饰成平末端之后再进行连接。请问将黏性末端变为平端的方法有哪些？

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本题答案：（1）5’—突出黏性末端的补平
本题解析：试题答案（1）5’—突出黏性末端的补平，一般选用大肠杆菌DNA聚合酶I的Klenow大片段聚合酶进行填补；
（2）3’—突出黏性末端的切平，一般选用T4噬菌体DNA聚合酶或单链DNA的SI核酸切平。

8、问答题  简单叙述同尾酶和同裂酶的差别。

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本题答案：同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末
本题解析：试题答 案同尾酶：来源不同，识别的序列不同，但能切出相同的粘性末端，连接后不能被相关的酶同时切割。
同裂酶：识别序列相同，切割位点有些相同，有些不同。分完全同裂酶和不完全同裂酶
（PS：完全同裂酶：识别位点和切点完全相同。
不完全同裂酶：识别位点相同，但切点不同。）

9、问答题  什么是Western印迹？它与Southern印迹有什么不同？

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本题答案：Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到
本题解析：试题答案Western印迹是将蛋白质经电泳分离后从凝胶中转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。它与Southern的不同在于探针的性质不同，在Western印迹中使用的探针是抗体（蛋白质）。

10、问答题  外源基因导入植物的方法主要有哪些？

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本题答案：物理方法：电击法、基因枪法（biolistiC.、显微
本题解析：试题答案物理方法：电击法、基因枪法（biolistiC.、显微注射法、微激光束法
化学方法：PEG介导法、脂质体介导法
生物学方法：农杆菌介导法、花粉管通道法

11、单项选择题  λ噬菌体外包装目的基因片段的大小应为（）

A.小于λ噬菌体DNA的50%
B.小于噬菌体DNA的75%
C.大于λ噬菌体DNA的105%
D.为λ噬菌体DNA的75%～105%

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

12、问答题  说明Sanger DNA测序法的原理。

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本题答案：SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：本题解析：试题答案SangerDNA测序法是建立在两个基本原理之上：
（1）核酸是依赖于模板在聚合酶的作用下由5’端向3’端聚合；
（2）可延伸的引物必须能提供游离的3’羟基末端，双脱氧核苷酸由于缺少游离的3’羟基末端，因此会终止聚合反应的进行。如果分别用4种双脱氧核苷酸终止反应，则会获得4组长度不同的DNA片段。通过比较所有DNA片段的长度可以得知核苷酸的序列。

13、单项选择题  下列基因调控元件中属于反式调控元件的是（）

A、阻遏蛋白
B、启动子
C、操作子
D、终止子
E、增强子

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本题答案：A
本题解析：暂无解析

14、问答题  以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体？

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本题答案：改造的置 91ExaM.org换型噬菌体载体，重组人外源片段之后，总体积不能
本题解析：试题答案改造的置换型噬菌体载体，重组人外源片段之后，总体积不能超过λ基因组的105％，不能少于λ基因组的75％。以置换型λ噬菌体DNA作为载体，首先要分离左、右两臂同外源DNA重组。如果没有外源片段，仅是两臂连接，长度短于λ基因组的75％，不能被包入噬菌体颗粒，就不能感染寄主，也就不能形成噬菌斑。如果插入了外源片段后，总长度超过丸基因组105％后，也不能包入噬菌体颗粒，自然不能形成噬菌斑。

15、单项选择题  Clark作了一个有趣的实验，发现TaqDNA聚合酶可以不需要模板，在双链DNA的末端加一个碱基，主要是加（）

A.dGTP
B.dATP
C.dCTP
D.dTTP

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本题答案：B
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16、单项选择题  在基因操作中所用的限制性核酸内切酶是指（）

A.I类限制酶
B.II类限制酶
C.III类限制酶
D.核酸内切酶
E.RNAase

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

17、单项选择题  分子克隆中用T载体主要是与下列哪种产物连接（）

A.单酶切产物
B.双酶切产物
C.同裂酶产物
D.PCR产物
E.酶切后形成的平末端产物

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本题答案：D
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18、问答题  试述载体构建一般方法

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本题答案：A目的基因分析
（1）ORF分析

本题解析：试题答案A目的基因分析
（1）ORF分析
（2）酶切位点分析
B载体选择与分析
（1）多克隆位点分析
（2）抗性标记分析
（3）启动子与其他筛选标记分析
C连接体系与连接时间确定

19、问答题  PCR的基本原理是什么？用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息？

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本题答案：（1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、
本题解析：试题答案（1）DNA半保留复制的原理，在体外进行DNA的变性、复性和引物延伸。
（2）至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。

20、问答题  重组体分子的选择方法主要有哪些？并简单阐述其原理。

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本题答案：从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如
本题解析：试题答案从总体上看，重组体分子的选择与鉴定方法基本上可以分为如下几个类型：
（1）基于载体遗传标记检测法
在构建基因工程载体系统时，载体DNA分子上通常携带了一定的选择性遗传标记基因，转化或转染宿主细胞后可以使后者呈现出特殊的表型或遗传学特性，据此可进行转化子或重组子的初步筛选。
（2）基于克隆DNA序列检测法
Southern印迹杂交：根据毛细管作用的原理，使在电泳凝胶中分离的DNA片段转移并结合在适当的滤膜上，然后通过与已标记的单链DNA探针的杂交作用以检测这些被转移的DNA片段。
（3）基于外源基因产物检测法
如果目的基因产物能降解某些药物使菌株呈现出抗性标记，或者基因产物与某些药物作用是显颜色反应，则可根据抗性或颜色直接筛选含目的基因的克隆子。

21、单项选择题  有简并引物的3’端尽量使用具有简并密码的氨基酸，这是因为（）

A.TaqDNA聚合酶具有一定的不精确性
B.便于排除错误碱基的掺入
C.易于退火
D.易于重组连接

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本题答案：A
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22、填空题  质粒有（）和松弛型两种类型，在克隆基因中常用的是松弛型，在表达研究中常用的是严紧型。

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本题答案：严紧型
本题解析：试题答案严紧型

23、问答题  怎样将一个平末端DNA片段插入到Eco RI限制位点中去？

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本题答案：化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的
本题解析：试题答案化学合成一些长为10bp含有Eco RI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生Eco RI的单链末端。这种片段就可以插入到任何Eco RI的限制性内切酶位点中。

24、单项选择题  下面哪一种不是产生星号活性的主要原因？（）

A.甘油含量过高
B.反应体系中含有有机溶剂
C.含有非Mg2+的二价阳离子
D.酶切反应时酶浓度过低

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本题答案：D
本题解析：暂无解析

25、问答题  大肠杆菌作为基因工程受体菌的优点和缺点是什么？

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本题答案：优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学
本题解析：试题答案优点：大肠杆菌培养方便、操作简单、成本低廉，基础生物学、分子遗传学等方面的背景知识清楚，对其基因表达调控的分子机理也比较了解，而且历经二十年的基因工程实践，大肠杆菌已发展成为一种安全的基因工程实验体系，有多种适用的寄主菌株和载体系列，大肠杆菌易于进行工业化批量生产。
缺点：在通常情况下，细菌的RNA聚合酶不能识别真核的启动子；许多真核基因的蛋白质产物需要经过翻译后的加工修饰，如正确的折叠和组装，而细菌中通常并没有这样的修饰机制，从而可能导致真核基因在大肠杆菌中的翻译产物无法产生有活性的蛋白；外源真核基因所表达的蛋白质分子往往能够被细菌的蛋白酶识别，并被当做“异已分子”降解掉。

26、多项选择题  关于II类限制酶说法正确的是（）

A.具内切核酸酶和甲基化酶活性
B.仅有内切核酸酶活性
C.只识别非甲基化的DNA序列
D.II类限制酶反应条件只需要Mg2+
E.II类限制酶反应需要Mg2+，ATP

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本题答案：B, D
本题解析：暂无解析

27、填空题  个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称限制性片段长度多态性（）。

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本题答案：RFLP
本题解析：试题答案RFLP

28、单项选择题  质粒是基因工程中最常用的运载体，它的主要特点是（）①能自主复制 ②不能自主复制 ③结构很小 ④蛋白质 ⑤环状RNA ⑥环状DNA ⑦能“友好”地“借居”

A.①③⑤⑦
B.②④⑥
C.①③⑥⑦
D.②③⑥⑦

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

29、多项选择题  DNA连接酶的功能是（）

A.恢复3’-OH与5’-P之间的磷酸二酯键
B.恢复缺口
C.恢复裂口
D.可使平末端与粘性末端连接

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本题答案：A, B
本题解析：暂无解析

30、问答题  试述基因工程技术的发展方向？

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本题答案：生物的遗传改良，生物反应器、基因治疗和基因疫苗等。本题解析：试题答案生物的遗传改良，生物反应器、基因治疗和基因疫苗等。

31、多项选择题  限制酶切反应结果显示为部分切割，可能原因是（）

A.限制酶失活
B.有抑制剂如SDS，EDTA等存在
C.反应条件不合适
D.DNA不纯
E.DNA结构（线形或超螺旋）的影响

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本题答案：A, B, C, D, E
本题解析：暂无解析

32、填空题  基因工程中用来获得有功能的异源蛋白质的体系称为（）。

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本题答案：表达系统
本题解析：试题答案表达系统

33、名词解释  重组子

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本题答案：含有重组DNA分子的转化子
本题解析：试题答案含有重组DNA分子的转化子

34、填空题  II型限制酶识别位点一般长度为（）个核苷酸对。

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本题答案：4~6
本题解析：试题答案4~6

35、问答题  合成cDNA第二链的主要策略有哪些？

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本题答案：①自身引导合成法
②置换合成法
③
本题解析：试题答案①自身引导合成法
②置换合成法
③PCR合成法
④快速扩增cDNA末端法
⑤双链cDNA末端的处理
⑥cDNA与载体的连接

36、问答题  可采用哪些方法进行目的片段与载体的连接？

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本题答案：（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，
本题解析：试题答案（1）目的片段与载体经相同的限制性内切酶或同尾酶切割，产生匹配的粘性末端，可直接进行连接。
（2）目的片段与载体经限制性内切酶切割后，产生平末端，也可直接进行连接。但是由于平末端连接效率较低，可采用下面的方法进行连接。
（3）同聚物加尾法：利用末端转移酶在载体及外源双链DNA的3’端各加上一段寡聚核苷酸，制成人工黏性末端，外源DNA和载体DNA分子要分别加上不同的寡聚核苷酸，如dA（dG）和dT（dC.，然后在DNA连接酶的作用下涟接成为重组的DNA。这种方法的核心是利用末端转移酶的功能，将核苷酸转移到双链DNA分子的突出或隐蔽的3’-OH上。以Mg2+作为辅助因子，该酶可以在突出的3’-OH端逐个添加单核苷酸，如果用Co2+作辅助因子则可在隐蔽的或平末端的3’-OH端逐个添加单个核苷酸。
（4）接头连接法：将人工合成的或来源于现有质粒的一小段DNA分子加到载体或外源DNA的分子上，在这一小段DNA分子上有某种限制性内切核酸酶的识别序列，这样便在载体DNA和外源DNA上制造出新的酶切点，产生匹配的黏末端以便于连接。这一小段含有酶切点的DNA分子称为连接器分子。
（5）PCR接头法：设计含有限制酶切位点的引物，在PCR过程中在目的片段直接加上接头

37、问答题  简述包含体形成的原因和包含体蛋白复性的主要步骤。

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本题答案：重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体
本题解析：试题答案重组蛋白在细菌中表达时，尤其当表达目的蛋白量超过细菌体总蛋白量10%时，会在细胞内与细菌杂蛋白、核酸等成分聚集成没有生物活性的直径0.1-0.3μm的固体颗粒，这种不溶性聚合体即包含体（inclusion body）。
生成包含体的原因可能有是蛋白质合成速度太快，多肽链相互缠绕，影响了多肽链的正确折叠，导致疏水基团外露等。
（包含体的形成有利于防止蛋白酶对表达蛋白的降解，并且非常有利于分离表达产物。但包含体形成后，表达蛋白不具有生物活性，因此必须溶解包含体并对表达蛋白进行复性。）
包含体复性即从伸展态－中间体－后期中间体－天然态的过程，操作步骤一般为用超声波、匀浆等使菌体破碎后，离心得到包含体－加入强蛋白质变性剂如6～8mol／L盐酸胍或9～10mol／L尿素溶解包含体－用透析、稀释和超滤复性法等等方法使之正确折叠。

38、单项选择题  采用基因工程技术将人凝血因子基因导入山羊受精卵，培育出了转基因羊。但是，人凝血因子只存在于该转基因羊的浮汁中。以下有关叙述，正确的是（）

A.人体细胞中凝血因子基因编码区的碱基对数目，等于凝血因子氨基酸数目的3倍
B.可用显微注射技术将含有人凝血因子基因的重组DNA分子导入羊的受精卵
C.在该转基因羊中，人凝血因子基因存在于乳腺细胞，而不存在于其他体细胞中
D.人凝血因子基因开始转录后，DNA连接酶以DNA分子的一条链为模板合成mRNA

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本题答案：B
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39、问答题  原核生物和真核生物的基因表达调控有何差别？

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本题答案：1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平
本题解析：试题答案1）原核基因表达调控的三个水平：转录水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控
原核基因表达调控主要是在转录水平上的调控。
2）真核生物基因表达的特点：
1．基因组DNA存在的形式与原核生物不同；
2．真核生物中转录和翻译分开进行；
3．基因表达具有细胞特异性或组织特异性；
4．真核基因表达的调控在多个水平上进行：DNA水平的调控、转录水平调控、转录后水平调控、翻译水平调控、蛋白质加工水平的调控；

40、填空题  限制酶识别序列为（）个碱基，则其切割频率的理论值应是4n。

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本题答案：n
本题解析：试题答案n

41、单项选择题  下列获取目的基因的方法中需要模板链是（）

A.从基因文库中获取目的基因
B.利用PCR技术扩增目的基因
C.反转录法
D.通过DNA合成仪利用化学方法人工合成

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本题答案：B
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42、名词解释  限制性核酸内切酶

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本题答案：是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。
本题解析：试题答案是一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基系列的核酸水解酶。

43、问答题  怎样将一个平末端的DNA片段插入到EcoRI的限制位点中去？

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本题答案：可以化学合成一个连接子（linker），即一段长为l0
本题解析：试题答案可以化学合成一个连接子（linker），即一段长为l0bp含有EcoRI识别位点的短的DNA片段，然后与待克隆片段两端连接起来，如果用EcoRI切割这种连接片段，就会产生EcoRI的单链末端。这种片段就可以插入到任何EcoRI的限制性核酸内切酶位点中。

44、问答题  为什么用同裂酶进行体外重组效率最高？

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本题答案：同裂酶是指来源不同的限制酶切割DNA后，产生相同的末端
本题解析：试题答案同裂酶是指来源不同的限制酶切割DNA后，产生相同的末端。多数同裂酶产生的粘性末端并非完全一致而是有四个碱基相同，这样用同裂酶切割载体和目的基因后的连接产物常会失去原有的限制酶位点，这样用来源:91考试网 91exam.org同裂酶进行重组时，限制酶切割反应后不用将该酶失活，即可直接进行重组连接，由于连接体系中原有限制酶存在，载体自连不会发生，从而保证了载体只同外源DN A的连接。

45、问答题  一般质粒DNA的构型有哪几种？在琼脂糖凝胶电泳中的有何特点？

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本题答案：超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA本题解析：试题答案超螺旋质粒DNA、开环质粒DNA、线状质粒DNA
在琼脂糖凝胶电泳的特点是：电泳的泳动速度由大到小分别是：
超螺旋质粒DNA>线状质粒DNA>开环质粒DNA

46、单项选择题  用下列方法进行重组体的筛选，只有（）说明外源基因进行了表达。

A.Southem印迹杂交
B.Northem印迹杂交
C.Western印迹
D.原位菌落杂交

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本题答案：C
本题解析：暂无解析

47、填空题  DNA分子标记的方法有（）；（）、末端标记法、交换反应标记法四种。

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本题答案：缺口平移法、随机引物法
本题解析：试题答案缺口平移法、随机引物法

48、问答题  如何将一平末端的DNA片段与BamHI形成的粘末端连接？

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本题答案：使用加接头连接法。人工合成一段含BamHI酶切位点的D
本题解析：试题答案使用加接头连接法。人工合成一段含BamHI酶切位点的DNA短片段，然后与该平末端片段两端连起来，用BamHI切割连接片段，即可形成BamHI的粘末端。

49、名词解释  Cosmid vector:黏粒载体

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本题答案：含有cos位点的质粒载体。
本题解析：试题答案含有cos位点的质粒载体。

50、单项选择题  采用BamHI单切载体和目的基因后，进行重组连接前要（）

A.65℃处理10分钟使BamHI灭活。
B.用碱性磷酸酶处理载体防止其自身环化。
C.电泳检测酶切结果。
D.A、B、C都正确。
E.只有A、C正确。

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本题答案：D
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51、单项选择题  用碱法分离质粒DNA时，染色体DNA之所以可以被除去，是因为（）

A.染色体DNA断成了碎片
B.染色体DNA分子量大，而不能释放
C.染色体变性后来不及复性
D.染色体未同蛋白质分开而沉淀

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本题答案：C
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52、单项选择题  关于PCR扩增停滞的原因有很多种，但下列各项中，（）项不是主要原因。

A.底物（模板）过剩
B.dNTP的大量消耗
C.产物的聚集
D.非特异性产物的竞争性抑制

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本题答案：B
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53、单项选择题  有关PCR的描述下列哪项不正确（）

A.是一种酶促反应
B.引物决定了扩增的特异性
C.扩增的产量按Y=m（1+X）n
D.扩增的对象是氨基酸序列
E.扩增的对象是DNA序列

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本题答案：D
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54、问答题  什么是基因文库？基因组文库与cDNA文库制备方法有何区别？

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本题答案：通过克隆技术将大分子DNA编码的全部或者绝大多数基因或
本题解析：试题答案通过克隆技术将大分子DNA编码的全部或者绝大多数基因或基因组进行扩增后的DNA片段混合物，称为基因文库或DNA文库、克隆库。分为基因组文库和cDNA文库两种。
基因组DNA文库的制备：从生物组织细胞提取出全部DNA，用物理方法（超声波、搅拌剪力等）或酶法（限制性核酸内切酶的不完全酶解）将DNA降解成预期大小的片段，然后将这些片段与适当的载体（常用噬菌体、粘粒或YAC载体）连接，转入受体细菌或细胞，这样每一个细胞接受了含有一个基因组DNA片段与载体连接的重组DNA分子，而且可以繁殖扩增，许多细胞一起组成一个含有基因组各DNA片段克隆的集合体，就是基因组文库。
cDNA文库的制备：提取出组织细胞的全部mRNA，在体外反转录成cDNA，与适当的载体（常用噬菌体或质粒载体）连接后转化受体菌，则每个细菌含有一段cDNA，并能繁殖扩增，许多细胞一起组成包含着某细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合称为该组织细胞的cDNA文库。

55、问答题  某学生在用EcoRI切割外源DNA片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因？

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本题答案：答盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。
本题解析：试题答案答盐离子浓度不对，温度不对，甘油浓度过高。

56、问答题  作为基因工程载体，其应具备哪些条件？

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本题答案：具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
本题解析：试题答案具有针对受体细胞的亲缘性或亲和性（可转移性）；
具有合适的筛选标记；
具有较高的外源DNA的载装能力；
具有多克隆位点（MCS）；
具有与特定受体细胞相适应的复制位点或整合位点。

57、单项选择题  若某质粒带有lacZ标记基因，那么与之相匹配的筛选方法是在筛选培养基中加入（）

A、半乳糖
B、葡萄糖
C、蔗糖
D、5-溴-4-氯-3-吲哚基-b-D-半乳糖苷（X-gal）
E、异丙基巯基-b-半乳糖苷（IPTG）

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本题答案：D
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58、名词解释  cDNA library:cDNA文库

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本题答案：是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载
本题解析：试题答案是指某生物某一发育时期所转录形成的cDNA片段与某种载体连接而成的克隆的集合。

59、单项选择题  多聚接头（Polylinker）指的是（）

A.含有多种限制性内切酶识别及切割顺序的人工DNA片段
B.含有多种复制起始区的人工DNA片段
C.含有多种SD顺序的人工DNA片段
D.含有多种启动基因的人工DNA片段

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本题答案：A
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60、单项选择题  限制酶的星号活性是指在非正常条件下，限制酶（）

A.识别和切割序列发生变化。
B.切割活性大大提高。
C.识别和切割序列与原来完全不同。
D.可以任意切割DNA。
E.只能部分切割DNA。

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本题答案：A
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61、单项选择题  基因工程操作的三大基本元件是：（I供体II受体III载体IV抗体V配体）（）

A.I+II+III
B.I+III+IV
C.II+III+IV
D.II+IV+V

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本题答案：A
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62、问答题  核酸操作的基本技术有哪些？

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本题答案：①核酸提取与纯化
②核酸的检测与保存
本题解析：试题答案①核酸提取与纯化
②核酸的检测与保存
③核酸的凝胶电泳
④核酸分子杂交

63、名词解释  MCS

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本题答案：指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶
本题解析：试题答案指载体上人工合成的含有紧密排列的多种限制核酸内切酶的酶切位点的DNA片段。

64、问答题  基因工程的定义与特征。

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本题答案：定义：在体外把核酸分子（DNA的分离、合成）插入载体分
本题解析：试题答案定义：在体外把核酸分子（DNA的分离、合成）插入载体分子，构成遗传物质的新组合（重组DNA），引入原先没有这类分子的受体细胞内，稳定地复制表达繁殖，培育符合人们需要的新品种（品系），生产人类急需的药品、食品、工业品等。
特征：
1、具跨越天然物种屏障的能力。
2、强调了确定的DNA片段在新寄主细胞中的扩增。

65、单项选择题  考斯质粒（cosmid）是一种（）

A.天然质粒载体
B.由λ-DNA的cos区与一质粒重组而成的载体
C.具有溶原性质的载体
D.能在受体细胞内复制并包装的载体

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本题答案：B
本题解析：暂无解析

66、问答题  什么是基因？根据基因的产物，基因可分为哪三类？

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本题答案：基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核
本题解析：试题答案基因是具有生物学功能的、在染色体上占据一定位置的一段核苷酸序列，是分子遗传的功能单位。
根据基因的产物，基因可分为三类：
转录并翻译编码蛋白质的基因：
包括结构蛋白基因、编码酶的基因、调节基因
转录但不翻译产物的基因：
包括tRNA、rRNA
不转录但有功能的DNA区段：
如启动子、操纵基因

67、问答题  DNA诱变有哪些种类，各有何特点？

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本题答案：1、随机诱变：目的基因的DNA片段中引入了大量的序列多
本题解析：试题答案1、随机诱变：目的基因的DNA片段中引入了大量的序列多样性，得到的具体突变体可以是单点突变也可能是多点突变。
2、寡核苷酸介导的定点诱变：寡核苷酸介导的定点诱变可以在任何感兴趣的位置加上限制性内切酶位点；能够把一个自然条件下从未被发现的突变精确放置在靶基因的特定位置。
3、PCR介导的定点诱变：制作简单，突变体回收率高。
4、盒式诱变：寡核苷酸盒置换靶DNA区段，可以获得数量众多的突变体。

68、填空题  限制酶是一类专门切割DNA的酶，它能特异性识别切割双链（）DNA。

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本题答案：单、双
本题解析：试题答案单、双

69、多项选择题  如果用限制酶切割DNA后得到的片段比预期的多，可能原因是（）

A.限制酶失活
B.限制酶的星号活性
C.有其他限制酶污染
D.有抑制剂存在
E.测试DNA中有其他DNA污染

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本题答案：B, C, E
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70、问答题  常用的目的基因与载体的连接方法有哪些？

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本题答案：外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重
本题解析：试题答案外源DNA片段同载体分子连接的方法，即DNA分子体外重组技术，主要是依赖于核酸内切限制酶和DNA连接酶的作用.一般说来在选择外源DNA同载体分子连接反应程序时，需要考虑到下列三个因素：
（1）实验步骤要尽可能地简单易行；
（2）连接形成的"接点”序列，应能被一定的核酸内切限制酶重新切割，以便回收插入的外源DNA片段；
（3）对转录和转译过程中密码结构的阅读不发生干扰。

71、名词解释  星号活性

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本题答案：限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测
本题解析：试题答案限制性内切核酸酶识别和切割特异性位点是在特定的条件下测定的。当条件改变时，许多酶的识别位点会改变，导致识别与切割序列的非特异性，这种现象称为星号活性。（“非最适的”反应条件例如高浓度的核酸内切限制酶、高浓度的甘油、低离子强度、用Mn2+取代Mg2+以及高pH值等。）克服星号活性的方法：维持反应体系适当的离子强度、较低的温度或酶浓度，尽可能缩短反应时间或DNA样品的重新处理等。

72、多项选择题  DNA片段重组连接可用下列哪些方法（）

A.平末端连接
B.粘末端连接
C.加接头连接
D.同聚尾连接
E.T载体连接

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本题答案：A, B, C, D, E
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73、问答题  如何用PCR制备突变DNA分子？

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本题答案：可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可
本题解析：试题答案可用PCR进行定点突变，即在特定位点引入突变。该突变可以是碱基替代、插入或者缺失。为了在靶基因特定位点导入突变，在PCR引物设计时，将一条引物设计成为与靶序列互补但在预期位点作碱基替换或缺失。在引物中的诱发突变序列应该位于引物的5′端或在引物中间部位，但绝不能位于3′端。诱变引物的3′区域（至少6～10个碱基）必须与靶DNA完全互补以使引物与模板的退火完全而且Taq酶能延伸引物。
PCR反应先在低特异性环境下反应5～10个循环以使错配得以发生（即在松弛的温度下），一旦少量的突变模板产生，就可以作为靶序列与引物完全互补。扩增反应的终产物即是所需的含有突变的扩增DNA分子，然后通过克隆和序列分析进行确证。

74、单项选择题  载体的功能是（I运送外源基因高效进入受体细胞II为外源基因提供复制能力III为外源基因提供整合能力）（）

A.I
B.I+III
C.II+III
D.I+II+III

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本题答案：D
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75、填空题  DNA带（）电荷，在电场中从负极向正极移动。

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本题答案：负
本题解析：试题答案负

76、单项选择题  基因工程菌中重组质粒的丢失机制是（）

A、重组质粒渗透至细胞外
B、重组质粒被细胞内核酸酶降解
C、重组质粒在细胞分裂时不均匀分配
D、重组质粒杀死受体细胞
E、重组质粒刺激受体细胞提高其通透性

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本题答案：C
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77、问答题  切口移位（nick translation）标记探针的主要步骤有哪些？

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本题答案：（1）DNaseI造成切口；
（2）DNA聚
本题解析：试题答案（1）DNaseI造成切口；
（2）DNA聚合酶III的5’→3’外切核酸酶进行切割；
（3）DNA聚合酶Ⅲ的5’→3’合成酶进行修补；
（4）在修补过程中，随着切口（nick）的移动，将放射性的底物掺人到双链DNA中。

78、单项选择题  有关基因工程的叙述中，错误的是（）

A、DNA连接酶将黏性末端的碱基对连接起来
B、限制性内切酶用于目的基因的获得
C、目的基因须由运载体导入受体细胞
D、人工合成目的基因不用限制性内切酶

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本题答案：A
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79、单项选择题  克隆菌扩增的目的是（I增殖外源基因拷贝II表达标记基因III表达外源基因）（）

A.I+II
B.I+III
C.II+III
D.I+II+III

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本题答案：D
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80、问答题  Northern印迹与Southern印迹有什么不同？

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本题答案：Northern印迹的原理同Southern印迹相比有
本题解析：试题答案Northern印迹的原理同Southern印迹相比有两点不同：
（1）转移的对象不同，Northern印迹是将RNA变性及电泳分离后，将其转移到固相支持物上的过程。
（2）虽然RNA电泳前不需像DNA那样进行酶切，但也需要变性。不过变性方法是不同的，它不能用碱变性，只是在加样前用甲醛、乙二醛或甲基氢氧化银变性，因为碱变性会导致RNA的降解。

81、多项选择题  下列哪些补体调节因子具有使机体正常组织细胞免受补体介导的损伤作用的功能()

A．B因子
B．MCP
C．CR1
D．C8bp
E．CD59

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本题答案：B, C, D, E
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82、单项选择题  目前在高等动物基因工程中广泛使用的载体是（）

A、质粒DNA
B、噬菌体DNA
C、病毒DNA
D、线粒体DNA
E、叶绿体DNA

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本题答案：C
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83、问答题  在酶切缓冲液中加入牛血清白蛋白（BSA）的目的与机理是什么？

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本题答案：目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓
本题解析：试题答案目的是保护酶的活性；机理是通过提高反应体系中蛋白质的浓度，防止内切酶失活。

84、问答题  何为载体？一个理想的载体应具备那些特点？

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本题答案：将外源DNA或基因携带入宿主细胞（hostcell）的
本题解析：试题答案将外源DNA或基因携带入宿主细胞（hostcell）的工具称为载体载体具备的特点：
①在宿主细胞内必须能够自主复制（具备复制原点）
②必须具备合适的酶切位点，供外源DNA片段插入，同时不影响其复制；
③有一定的选择标记，用于筛选；
④最好具有较高的拷贝数，便于制备。

85、单项选择题  识别基因序列不同，但酶切后产生的粘性末端相同的一类酶为（）

A.同工酶
B.同尾酶
C.同裂酶
D.同位酶

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本题答案：B
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86、问答题  影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些？

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本题答案：（1）DNA的纯度
（2）DNA甲基化的程度
本题解析：试题答案（1）DNA的纯度
（2）DNA甲基化的程度
（3）酶切消化反应的温度
（4）DNA的分子结构
（5）核酸内切限制酶的缓冲液

87、问答题  简述λ噬菌体载体的克隆原理及一般步骤？

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本题答案：原理：载体和外源DNA经酶切后，外源DNA片段插入到载
本题解析：试题答案原理：载体和外源DNA经酶切后，外源DNA片段插入到载体的适当位置，或置换载体的填充片段。连接形成重组子在体外噬菌体蛋白作用下，包装形成噬菌体颗粒，通过噬菌体颗粒感染大肠杆菌将重组DNA注射到宿主中，经过裂解生长，可增殖重组DNA。
步骤：
①通过裂解过程增殖载体
②回收、分离纯化载体
③载体与外源DNA的酶切
④外源DNA与载体的连接
⑤重组噬菌体的体外包装
⑥包装噬菌体颗粒感染宿主
⑦筛选。

88、单项选择题  某一重组DNA（6.2kb）的载体部分有两个SmaI酶切位点。用SmaI酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmaI酶切位点共有（）

A.4个
B.3个
C.2个
D.至少2个

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本题答案：D
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89、名词解释  柯斯（C0S）质粒

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本题答案：带有λ噬菌体的COS位 点和整个pBR322的DNA顺序的大肠
本题解析：试题答案带有λ噬菌体的COS位点和整个pBR322的DNA顺序的大肠杆菌质粒。

90、单项选择题  构建基因文库一般使用的载体是（） I质粒；IIλ-DNA；IIICosmid

A、I
B、II
C、III
D、II+III
E、I+II+III

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本题答案：E
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91、单项选择题  关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有（）不太恰当。

A.由作用于同一DNA序列的两种酶构成
B.这一系统中的核酸酶都是II类限制性内切核酸酶
C.这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰
D.不同的宿主系统具有不同的限制--修饰系统

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本题答案：B
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92、单项选择题  启动子的特征之一是（）

A、GC富积区
B、TATABox
C、转录起始位点
D、长度平均1kb
E、含有某些稀有碱基

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本题答案：B
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93、单项选择题  关于限制性内切核酸酶的来源及其天然存在的意义，下列哪种说法是正确的？（）

A.来自噬菌体，用于复制病毒DNA
B.来自噬菌体，具有抗微生物作用
C.来自酵母菌，参与DNA复制
D.来自细菌，有防御病毒侵染的意义
E.是细菌内的DNA复制酶

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本题答案：D
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94、问答题  什么是原位杂交技术？其基本过程如何？

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本题答案：根据核酸杂交原理，利用基因探针检出培养板上重组转化体菌
本题解析：试题答案根据核酸杂交原理，利用基因探针检出培养板上重组转化体菌落位置的技术。
基本过程：
（1）将硝酸纤维素滤膜铺放在生长着转化菌落的平板表面，使其中的质粒DNA转移到滤膜上。
（2）取出滤膜，作溶菌、碱变性（0.5mol/LNaOH），酸中和（Tris.ClpH7.4）等处理后，转移到一张干的滤纸上，置于室温20~30min，使滤膜干燥。将滤膜夹在两张干的滤纸之间，在真空烤箱中于80℃烘烤2h，固定DNA。
（3）带有DNA印迹的滤膜同32P标记的适当探针杂交、以检测带有重组质粒（含有被研究的DNA插入片段）的阳性菌落。
（4）将放射自显影的X光底片同保留下来的原菌落平板对照，从中挑出阳性菌落供作进一步的分析研究

95、单项选择题  某一重组D、NA、（6.2kB）的载体部分有两个SmA、I酶切位点。用SmA、I酶切后凝胶电泳上出现四条长度不同的带子，其长度总和与已知数据吻合，该重组分子插入片段上的SmA、I酶切位点共有（）

A、4个
B、3个
C、2个
D、至少2个

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本题答案：D
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96、填空题  在翻译过程中，mRNA必需首先与核糖体相结合才能进行蛋白质合成。在原核生物中，mRNA分子上有两个核糖体结合位点，一个是（），另一个是（）。

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本题答案：起始密码AUG；SD序列
本题解析：试题答案起始密码AUG；SD序列

97、单项选择题  包涵体是一种（）

A、受体细胞中难溶于水的蛋白颗粒
B、大肠杆菌的亚细胞结构
C、噬菌体或病毒DNA的体外包装颗粒
D、用于转化动物细胞的脂质体
E、外源基因表达产物的混合物

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本题答案：E
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98、问答题  如何有效地提高外源基因的表达效率？

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本题答案：⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距
本题解析：试题答案⑴提高启动子强度
⑵缩短启动子同克隆基因间距离
⑶高效的翻译起始序列
⑷高效的转录终止区
⑸提高质粒拷贝数及稳定性
⑹用以下方法提高翻译水平：
①调整SD序列与AUG间的距离
②用点突变的方法改变某些碱基
③增加mRNA的稳定性的
⑺减轻细胞的代谢负荷：
①诱导表达
②表达载体的诱导复制
⑻提高表达蛋白的稳定性，防止其降解：
①克隆一段原核序列，表达融合蛋白
②采用某种突变菌株
③表达分泌蛋白质

99、填空题  在LacI标记基因插入外源基因，经IPTG诱导，在X-gal培养基中显白色，为阳性克隆，未插入基因的克隆显蓝色，为（）性克隆。

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本题答案：阴
本题解析：试题答案阴

100、问答题  什么是基因组文库（genomiclibrary）？它同遗传学上的基因库有什么不同？

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本题答案：基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基
本题解析：试题答案基因组文库是用基因工程的方法，人工构建的含有某一生物基因组DNA的各种片段的克隆群。包括下列过程：高分子质量染色体DNA的制备；体外重组连接；将重组DNA导入寄主细胞并扩增；筛选。基因组文库同遗传学上所讲的基因库是完全不同的概念。基因库（genepoo1）是指在进行有性生殖的某一群体中，能进行生殖的个体所含总的遗传信息。在基因组文库的构建中，由于使用的载体不同，分为噬菌体载体和黏粒载体构建的基因组文库、YAC文库、BAC文库等。