1、综合题  科学家通过探究DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶的活性，从而抑制肿瘤细胞生长增殖以寻找一种抑制肿瘤细胞的新途径。
方法思路：
①构建干扰质粒____[插入针对人体端粒酶逆转录酶亚基(hTERT)的mRNA的干扰序列]和对照质粒PSG—CTR(插入不针对人体任何mRNA序列的对照组序列)。
②将空质粒PSG(不含目的基因)、干扰质粒PSG—AS和对照质粒分别感染肝癌细胞。
③一段时间后观察检测细胞的____。计算细胞凋亡率，绘制肝癌细胞生长曲线。结果如下图：

请回答：
(1)完成实验步骤中的空格：①．___________；②．___________。
(2)在构建质粒时，要将质粒导入大肠杆菌细胞并用_______培养基进行筛选鉴定，然后再提取。因此，在构建的表达载体质粒上必须含有__________。
(3)端粒酶可以通过以自身的_______为模板，_______为原料来合成端粒DNA。
(4)分析实验结果，得出实验结论：__________________________。

参考答案：(1)PSG—AS? 端粒酶活性、细胞凋亡情况、细胞生长情况
(2)选择? 标记基因
(3) RNA? 4种脱氧核苷酸
(4)从结果可知PSG—AS导入肝癌细胞发挥作用后，端粒酶活性降低，细胞凋亡率升高，细胞生长受抑制，说明通过DNA载体途径的RNA干扰技术抑制端粒酶活性的方式，能较好抑制肿瘤细胞

本题解析：

本题难度：困难

2、连线题  (选做题)下图为某种质粒表到载体简图，小箭头所指分别为限制性内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ的酶切位点，ampR为青霉素抗性基因，tctR为四环素抗性基因，P启动子，T为终止子，ori为复制原点。已知目的基因的两端分别有包括EcoRⅠ、BamHⅠ在内的多种酶的酶切位点。据图回答：

(1)将含有目的基因的DNA与质粒该表达载体分别用EcoRI酶切，酶切产物用DNA连接酶进行连接后，其中由两个DNA片段之间连接形成的产物有__________、_________、__________三种。若要从这些连接产物中分离出重组质粒，需要对这些连接产物进行_____________。
(2)用上述3种连接产物与无任何抗药性的原核宿主细胞进行转化实验。之后将这些宿主细胞接种到含四环素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物是_____________；若接种到含青霉素的培养基中，能生长的原核宿主细胞所含有的连接产物____________。
(3)目的基因表达时，RNA聚合酶识别和结合的位点是__________，其合成的产物是____________。
(4)在上述实验中，为了防止目的基因和基因和质粒表达载体在酶切后产生的末端发生任意连接，酶切时应选用的酶是_____________。

参考答案：(1)目的基因--载体连接物? ?载体--载体连接物? 目的基因--目的基因连接物? 分离纯化(答案合理即可)
(2)载体--载体连接物? 目的基因--载体连接物、载体--载体连接物
(3)启动子? mRNA
(4)EcoRⅠ和BamHⅠ

本题解析：

本题难度：困难

3、选择题  下图是生产转基因抗虫棉技术的流程图。已知卡那霉素抗性基因(kanR)常作为标记基因，只有含卡那霉素抗性基因的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下列叙述正确的是

[? ]
A．为了防止黏性末端任意连接，可将抗虫基因和质粒均用两种限制酶进行处理
B．为检测抗虫基因是否成功表达，将“离体棉花叶片组织”放在含卡那霉素的培养基上培养
C．卡那霉素抗性基因(kanR)中不可能存在限制酶的酶切位点
D．生产抗虫棉的整个过程中只需要基因工程操作即可

参考答案：A

本题解析：

本题难度：一般

4、选择题  在基因工程中要使目的基因与运载体结合形成重组DNA，一般所需的两种酶是
①限制酶 ②DNA 连接酶 ③解旋酶 ④DNA 聚合酶
[? ]
A．①②
B．③④
C．①④
D．②③

参考答案：A

本题解析：

本题难度：简单

5、连线题  转基因抗病香蕉的培育过程如图所示。质粒上有PstⅠ、SmaⅠ、EcoRⅠ、ApaⅠ等四种限制酶切割位点。请回答：

(1)构建含抗病基因的表达载体A时，应选用限制酶________，对________进行切割。
(2)培养板中的卡那霉素会抑制香蕉愈伤组织细胞的生长，欲利用该培养基筛选已导入抗病基因的香蕉细胞，应使基因表达载体A中含有________，作为标记基因。
(3)香蕉组织细胞具有________，因此，可以利用组织培养技术将导入抗病基因的香蕉组织细胞培育成植株。图中①、②依次表示组织培养过程中香蕉组织细胞的__________。

参考答案：(1)Pst Ⅰ、EcoR Ⅰ　含抗病基因的DNA、质粒
(2)抗卡那霉素基因?
(3)全能性 　脱分化、再分化

本题解析：

本题难度：一般