1、连线题  在进行DNA亲子鉴定时，需大量的DNA。PCR技术(多聚酶链式反应)可以使样品DNA扩增，获得大量DNA克隆分子。该技术的原理是利用DNA的半保留复制，在试管中进行DNA的人工复制(如下图，图中黑色长方形是引物)。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十亿培，使实验室所需的遗传物质不再受限于活的生物体。

(1)图中的变性、延伸分别是指____________、____________。
(2)假设PCR反应中的DNA模板为P，第一轮循环的产物2个子代DNA为N1，第二轮的产物4个子代DNA为N2，N1、N2中分别含有模板DNA 单链的DNA分别有______个、_____个。若继续循环，该DNA片段共经过30次循环后能形成______个DNA片段。
(3)某样品DNA分子中共含3000个碱基对，碱基数量满足：(A+T)/(G+C)=1/2，若经5次循环，至少需要向试管中加入_____个腺嘌呤脱氧核苷酸。(不考虑引物所对应的片段)
(4)若下图为第一轮循环产生的产物。请绘出以a链和b链为模板经PCR扩增的产物。

参考答案：(1)模板DNA双链解旋形成单链? ?在DNA聚合酶的作用下，原料脱氧核苷酸聚合形成新的DNA链
(2)2? 2? ?230
(3)31000
(4)如图(画图的关键是注意引物A、B的位置和所对应的模板链)。

本题解析：

本题难度：一般

2、选择题  多聚酶链式反应（PCR）是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。PCR过程一般经历下述三十多次循环：95℃下使模板DNA变性．解链→55℃下复性（引物与DNA模板链结合）→72℃下引物链延伸（形成新的脱氧核苷酸链）。下列有关PCR过程的叙述中不正确的是：?
[? ]
A．变性过程中破坏了DNA分子内碱基对间的氢键，也可利用解旋酶实现
B．复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成
C．延伸过程中需要DNA聚合酶、ATP、四种核糖核苷酸
D．PCR与细胞内DNA复制相比所需要酶的最适温度较高

参考答案：C

本题解析：

本题难度：一般

3、选择题  标准的PCR过程一般分为变性、复性、延伸三大步，这三大步需要的温度依次是
[? ]
A．92℃，50℃，72℃
B．72℃，55℃，94℃
C．55℃，94℃，72℃
D．80℃，55℃，72℃

参考答案：A

本题解析：

本题难度：简单

4、选择题  (附加题)下图是PCR技术一轮循环中的某一过程，下列叙述错误的是

[? ]
A．图中表示的是一轮循环中的延伸过程
B．PCR技术所用到的引物都是一小段含有30～50个核苷酸的DNA
C．从图中分析可知脱氧核苷酸是从引物的3′端连上的
D．分析PCR一轮循环可知磷酸二酯键比氢键的热稳定性强

参考答案：B

本题解析：

本题难度：一般

5、填空题  (选做题)为了实现燃料供应来源多样化，发展长期替代化石燃料的产品如燃料酒精、生物柴油、沼气等已经列入了我国未来10年的发展计划。
　　广东省是我国甘蔗的主产区之一。甘蔗是一种高光效的C4植物，单位面积产量很高，种植面积日益扩大，目前已成为南方地区燃料酒精生产的重要原料。利用甘蔗生产燃料酒精的一般工艺流程为：甘蔗→榨汁(蔗糖)→酵母发酵→蒸馏→成品(燃料酒精)请根据上述材料，回答下列问题：
(1)简述甘蔗大规模快速繁殖技术的过程。
(2)具有耐高糖和耐酸特性的酵母菌是理想的酒精发酵菌种，对野生酵母菌进行诱变后通过筛选可以得到具有这些特性的突变菌，诱变及筛选过程如下：
步骤1：野生菌液体培养一段时间后接受紫外线照射诱变处理。
步骤2：制备选择培养基。在基本培养基的基础上，注意_____和_____，加琼脂后灭菌，制成固体平板。
步骤3：将紫外照射后的菌液稀释涂布平板。
步骤4：根据_______筛选出突变菌。
(3)上述步骤2、3和4的依据分别是_________________。
(4)利用获得的突变菌和蔗汁进行酒精发酵实验，除了将培养基灭菌、保持空间洁净外，发酵过程中防止外来杂菌入侵还有哪些可行方法？(列举两种)
(5)甘蔗榨汁以后还有大量的蔗渣废弃物，主要成分为木质素、纤维素和半纤维素，但是酵母菌无法直接利用，原因是其___________。请提出解决该问题的方法。(列举两种方法)
(6)突变菌往往带有一些特殊的基因。在获得这些基因的过程中，PCR技术相当重要。PCR扩增反应中加入引物和DNA聚合酶的作用分别是什么？

参考答案：(1)选取甘蔗外植体，通过诱导脱分化产生愈伤组织，然后调整植物激素比例，再分化形成芽和根，获得大量试管苗(或通过诱导大量形成胚状体，制成人工种子，适宜条件下萌发长成幼苗)。
(2)步骤二：添加高浓度蔗糖(葡萄糖)? ? 调低pH值? 步骤四：是否能在选择培养基上生长
(3)提供高糖和酸性的筛选环境；获得单菌落；能生长代表该菌落具有耐高糖和耐酸的特性
(4)①．利用突变菌的耐酸特性，降低培养基的pH值，达到抑菌的日的；②．利用突变菌的耐高糖特性，通过高渗环境达到抑菌目的；③．保持厌氧环境，达到抑菌目的；④．在培养基中添加一些抑制物如特殊的抗生素，达到抑菌目的。
(5)缺乏相应分解酶系(或缺乏纤维素和半纤维素酶)在酵母菌中转入分解酶系相关基因，利用酶或微生物分解蔗渣；利用物理和化学方法分解蔗渣；将酵母菌与其他能分解蔗渣的微生物混合发酵。
(6)引物的作用是结合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位点；DNA聚合酶的作用是从引物的3′端开始催化DNA链的延伸。

本题解析：

本题难度：困难