32.[生物一现代生物科技专题]必答题(10分)

肺细胞中的let7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导人肺癌细胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如图1。

请回答：

(1)进行过程①时，需用       酶切开载体以插入let-7基因。载体应有RNA聚合酶识别和结合的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为       。

(2)进行过程e委时，需用       酶处理贴附在培养皿壁上的细胞，以利于传代培养。

(3)研究发现，如let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响机理如图2。据图分析，可从细胞中提取.

           进行分子杂交，以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可能是由于细胞中            (RASmRNA／RAS蛋白质)含最减少引起的。

答案：⑴限制（限制性核酸内切）  启动子  ⑵胰蛋白酶   ⑶RNA   RAS蛋白质

解析：本题主要考查基因工程的相关知识。切开载体以插入目的基因需要用限制酶，限制酶能在特定的系列中的特定位点上将DNA切断；启动子是位于目的基因首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位。在动物细胞培养的过程中，要用胰蛋白酶或者胶原蛋白酶将组织细胞分散开，有利于细胞直接从培养中吸取营养物质并派出代谢废物，同时解除接触抑制有利于细胞增殖。如果let-7基因进行转录，细胞中就会出现miRNA，用基因探针检测细胞中是否出现miRNA来判断let-7基因是否进行转录，那么应该提取细胞所有的RNA与相应的基因探针进行分子杂交。由图可知癌细胞受到抑制的机理是let-7基因转录形成miRNA与癌基因RAS转录形成的RASRNA进行配对，从而阻止RASRNA的翻译，从而减少RAS蛋白质的含量。